Diagnostic PCR pentru câte zile se face. Analize și diagnostice. Examinare PCR cuprinzătoare

Descriere

Reacția în lanț a polimerazei (PCR, PCR) a fost inventată în 1983 de biochimistul american Carey B. Mullis. În 1993, i s-a acordat Premiul Nobel pentru această descoperire.

Astăzi, domeniile de aplicare a PCR ca metodă modernă biologia moleculară este extrem de largă. Diagnosticul PCR ocupă un loc special în practica medicală. Iar motivul pentru aceasta este destul de simplu: reacția în lanț a polimerazei face imposibilul posibil.

Diagnosticul PCR este adesea descris figurativ ca o metodă prin care puteți găsi un ac într-un fân și apoi să construiți un teanc de ace. Un „ac” este o mică bucată din materialul genetic al unei celule (ADN sau ARN).

Astfel, descoperirea acestei metode este una dintre cele mai remarcabile evoluții în domeniul biologiei moleculare din ultimele decenii. Dezvoltarea metodei PCR a permis diagnosticului medical în ansamblu să crească la un nivel calitativ nou.

Bazele PCR

Metoda se bazează pe copierea selectivă multiplă (amplificare) a unei regiuni ADN specifice pentru a obține o astfel de cantitate de material genetic care va fi suficientă pentru detectarea vizuală. În acest caz, doar o anumită regiune de ADN este copiată (amplificată) în mod repetat, cu condiția să fie prezent în biomaterialul studiat.

În plus, cercetarea, pe lângă simpla creștere a numărului de copii ale regiunilor ADN, permite alte manipulări cu material genetic. Prin urmare, metoda este utilizată pe scară largă în cercetare științifică, practică biologică și medicală: în diagnosticul bolilor infecțioase și ereditare, în identificarea mutațiilor, genotiparea, stabilirea paternității, identificarea personalității etc.

PCR în diagnosticul bolilor infecțioase

Astăzi, diagnosticul PCR al infecțiilor este unul dintre cele mai exacte, sensibile și eficiente clinice metode de laborator... Mai mult, spectrul agenților patogeni detectați este practic nelimitat - s-ar fi dezvoltat un sistem de testare pentru analiza PCR a agentului patogen dorit.

Datorită sensibilității sale ridicate, PCR permite detectarea agentului patogen chiar și cu conținutul său minim (adică, doar câteva molecule din ADN-ul său sunt prezente în biomaterialul studiat).

PCR detectează agenții patogeni ai bolilor infecțioase atunci când este imposibil să se facă prin alte metode (imunologice, culturale, microscopice). Prin urmare, pentru o serie de agenți infecțioși, metoda reacției în lanț a polimerazei a devenit „standardul de aur”, este testată în timp și testată clinic. În diagnosticul modern de laborator al bolilor infecțioase, PCR este metoda cea mai sensibilă și specifică pentru detectarea directă a agenților patogeni. Acest lucru permite nu numai stabilirea etiologiei bolii, ci și controlul evoluției procesului infecțios și evaluarea eficacității tratamentului.

Analiza pentru ITS prin PCR este deosebit de relevantă în cursul asimptomatic al procesului infecțios cauzat de microorganisme patogene necondiționate (Chlamydia, determinarea calitativă a ADN-ului; Micoplasma, determinarea calitativă a ADN-ului; Agent cauzal al gonoreei, determinarea calitativă a ADN-ului; Agent cauzativ al trichomoniasis, determinarea calitativă a ADN-ului). De exemplu, cu gonoreea cronică la femei, chiar și cu ajutorul unei metode bacteriologice, adesea nu este posibil să se identifice un gonococ, în ciuda simptomelor existente ale unui proces inflamator cronic în colul uterin sau uretra.

Diagnosticul modern PCR permite nu numai identificarea materialului genetic al agenților infecțioși, ci și determinarea concentrației ADN-ului / ARN-ului acestora (format de cercetare cantitativă). Determinarea numărului de agenți patogeni are esenţialîn luarea deciziei cu privire la numirea tratamentului, mai ales dacă sunt identificate microorganisme oportuniste (Micoplasma, determinarea cantitativă a ADN-ului; Tipizarea ureaplasmei, determinarea cantitativă a ADN-ului).

Una dintre direcțiile principale în dezvoltarea metodei PCR este formatul „Multiprime” dezvoltat în CMD, care face posibilă identificarea mai multor agenți patogeni într-o eprubetă (și o reacție).

• Agenți patogeni ai infecțiilor transmise prin căpușe ixodide

Diagnosticul PCR al hepatitei

În prezent, sunt cunoscuți cel puțin 5 viruși, a căror capacitate de a provoca leziuni hepatice a fost dovedită. Aceștia sunt agenții cauzali ai hepatitei A, B, C, D, E. În cazuri rare, hepatita poate fi cauzată de virusurile Epstein-Barr și herpes simplex. Abilitatea de a infecta ficatul unor agenți precum TT și virusurile hepatitei G nu este recunoscută astăzi de toată lumea. Toți acești viruși aparțin unor familii diferite, au proprietăți biologice diferite și, în consecință, tactica de tratament va diferi în mod semnificativ, în funcție de etiologia hepatitei.

Având în vedere cele de mai sus, o problemă foarte urgentă este un diagnostic etiologic adecvat al hepatitei virale cu identificarea unui agent patogen specific. Acest lucru este imposibil fără utilizarea metodelor biologice moleculare moderne. Prin urmare, diagnosticul hepatitei prin metoda reacției în lanț a polimerazei este unul dintre cei mai importanți pași în determinarea cauzei bolii și determinarea unor tactici de tratament ulterioare.

PCR în diagnosticul infecției cu HIV

În prezent, pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV, se folosește abordarea cea mai accesibilă și în același timp sensibilă - detectarea anticorpilor împotriva HIV în sânge utilizând un test imunosorbent enzimatic (ELISA), urmat de confirmarea rezultatelor pozitive a analizei prin imunoblotare (IB). Eficiența detectării persoanelor infectate cu HIV folosind această abordare poate ajunge la 99% sau mai mult.

Dar diagnosticul serologic al infecției cu HIV are o serie de limitări:

1. Ineficiență în perioada așa-numitei. „Fereastra serologică” (în primele săptămâni după infecție, anticorpii nu sunt detectați din cauza absenței lor sau a concentrației scăzute).
2. Anticorpii împotriva HIV au fost depistați de mult timp la toți copiii născuți de mame infectate cu HIV.
3. Rezultate ELISA fals pozitive datorită prezenței în sânge a anticorpilor împotriva antigenelor similare cu antigenele HIV.
4. Rezultate fals negative și discutabile ale ELISA și imunoblotarea (în special la pacienții cu stadiu terminal boli).

Prin urmare, testele PCR pentru testarea infecției cu HIV sunt utilizate din ce în ce mai mult astăzi. Conform " Recomandări metodice privind testarea infecției cu HIV "(aprobat de Ministerul Sănătății și Dezvoltării Sociale al Federației Ruse la 08/06/2007)" dacă există criterii epidemiologice care indică un risc recent de infecție cu HIV pentru pacienți și, în același timp, probabil rezultate fals pozitive sau fals negative în ELISA și IB, de exemplu, atunci când se examinează copii, născuți de mame infectate cu HIV sau pacienți în perioada „ferestrei seronegative”, se utilizează metoda PCR, în care este detectat materialul genei HIV ... .. ". Și în cazul unui diagnostic deja stabilit de infecție cu HIV, analiza PCR este utilizată pentru prognostic, observare dinamică și monitorizare a terapiei.

• Determinarea calitativă a virusului imunodeficienței umane a ADN-ului provirusului, PCR
• Determinarea cantitativă a ARN-ului virusului imunodeficienței umane, PCR
• Diagnostic cuprinzător: determinarea calitativă a virusului hepatitei C ARN / virusul hepatitei B ADN / virusul imunodeficienței umane (HIV) tip 1 și 2 ARN

La Centrul pentru Diagnostice Moleculare (CMD), puteți face un test PCR HIV anonim.

Reacția în lanț a polimerazei este cunoscută de 30 de ani. Este utilizat pe scară largă în multe domenii, de la arheologie la genetică. Este metoda PCR care ajută la stabilirea paternității, dar este cel mai adesea utilizată pentru a identifica diferite boli infecțioase din corpul uman. Ce este analiza PCR?

Aceasta nu este altceva decât o imitație a procesului de multiplicare a ADN-ului, ca urmare a căruia se obține un număr imens de molecule identice dintr-un mic fragment al unei molecule de ADN pentru o perioadă de timp (de obicei câteva ore), care poate fi deja studiat. Vă amintește acest lucru de ceva? Foarte similar cu clonarea. Reacția în lanț a polimerazei este baza clonării și este utilizată în reproducerea țesuturilor în condiții de laborator. Ei bine, în medicină, analiza PCR este utilizată pentru detectarea bacteriilor din corpul uman (micoplasma ,,, precum și a agenților patogeni și), a virușilor (și a papilomavirusului), a ciupercilor (agenților patogeni) și a protozoarelor (Trichomonas).

Această metodă de diagnosticare moleculară a agenților patogeni infecțioși este cea mai sensibilă. Permițând detectarea chiar și a unui singur fragment de ADN într-o probă, metoda PCR nu are practic nicio limită de sensibilitate. Și, în majoritatea cazurilor, rezultatul său arată o precizie de 100%, mai ales atunci când se diagnostichează infecții bacteriene. El nu dă niciodată pozitive false.

De asemenea, este universal, deoarece vă permite să identificați simultan mai multe microorganisme într-o singură probă, în timp ce se utilizează metodele bacteriologice căi diferite cultivare pentru diferite grupuri de agenți patogeni. În plus, PCR simplifică mult sarcina cercetătorilor, reducând timpul de testare la 24 de ore și simplificând cerințele pentru transportul probelor. Dacă materialul pentru metodele bacteriologice și virologice trebuie să fie viu, atunci orice conține ADN este potrivit pentru metoda PCR, chiar și celulele moarte.

Analiza PCR pentru infecții este extrem de importantă deoarece majoritatea acestora, care afectează corpul uman, se dezvoltă asimptomatic sau prezintă simptome similare. De exemplu, metoda PCR este utilizată pe scară largă pentru a identifica cauzele bolilor hepatice, inclusiv A, B, C, D, E, precum și virusul herpes simplex. Pentru a combate fiecare dintre viruși, este necesar să se aplice tactici de tratament complet diferite. Prin urmare, pentru a prescrie o terapie eficientă, medicul trebuie să identifice cu precizie agentul patogen. Și dacă efectuați cercetări prelungite, infecția poate deveni cronică, provocând complicații care sunt deosebit de periculoase în timpul sarcinii sau a altor boli concomitente. Și metoda PCR este principalul ajutor în diagnosticarea rapidă și precisă.

Dar aici trebuie să înțelegeți că fiind aproape singurele metode de detectare a unor microorganisme (de exemplu, micoplasma), PCR poate să nu fie potrivită pentru alții (stafilococi, streptococi etc.) Prin urmare, un specialist ar trebui să aleagă metode de diagnostic și să prescrie tratament. Nu ar trebui să mergi singur la laborator și să faci toate analizele la rând. Ele pot fi complet inutile. Și în clinicile private, la cererea dvs. și pentru banii dvs., ei vor efectua analize pentru dvs., fără a întreba măcar de ce aveți nevoie de ele.

Cum se ia testul PCR

Pentru efectuarea cercetărilor prin metoda PCR, se utilizează fluide biologice și secreții ale corpului uman, care pot conține microbi și fragmentele acestora. Acestea includ: sânge, salivă, flegmă și urină. În plus, pentru analiza PCR, se iau resturi de celule epiteliale ale membranei mucoasei uretrei și ale canalului cervical. De exemplu, sângele este prelevat dintr-o venă pentru a detecta HIV și hepatita. Pentru a diagnostica infecțiile organelor genitale, se analizează descărcarea de la organele genitale, un frotiu din colul uterin sau uretra. Și pentru a diagnostica mononucleoza infecțioasă, se utilizează un tampon de gât.

Pregătirea pentru analiza PCR

Înainte de a efectua analiza, trebuie să vă consultați medicul și să urmați cu atenție recomandările acestuia. Adresați-vă medicului dumneavoastră ce fel de materiale vor fi luate pentru cercetare. Un test de sânge PCR se face pe stomacul gol. Dar, înainte de a face un test PCR sub formă de răzuiri de celule epiteliale, medicii recomandă pacienților să bea bere seara, să meargă la o baie și să facă sex. Sună ciudat, dar toate acestea activează infecția în organele genitale, care poate apărea într-o formă foarte ușoară și ajută la identificarea acesteia.

Analiza decodării PCR

Rezultatul analizei PCR poate fi pozitiv și negativ. Acest lucru este întotdeauna menționat în document, care trebuie emis în laborator fără greș. Un rezultat pozitiv înseamnă că ADN-ul infecției a fost găsit în materialul biologic donat de pacient. Un rezultat negativ nu înseamnă nicio infecție în corpul uman.

Deoarece metoda PCR este extrem de sensibilă, trebuie utilizată cu mare atenție pentru a monitoriza eficacitatea tratamentului și doar la câteva săptămâni după terapie. La urma urmei, chiar și un fragment de ADN al unui agent patogen mort va da un rezultat pozitiv al testului PCR.

Reacția în lanț a polimerazei îi ajută pe medici să diagnosticheze infecțiile care apar în corpul uman într-o formă latentă, prevenind dezvoltarea acestora și deteriorarea severă organe interne... Monitorizați-vă cu atenție starea de sănătate și, la prima suspiciune de infecție, contactați medicul.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de înaltă precizie a diagnosticului genetic molecular, care permite detectarea diferitelor boli infecțioase și ereditare la om, atât în ​​stadiile acute, cât și cronice, și cu mult înainte ca boala să se poată manifesta.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) a fost dezvoltată în 1983 de Carey Mullis (SUA), pentru care a primit Premiul Nobel pentru chimie în 1993.

Analiza PCR a devenit un fel de „etalon de aur” pentru majoritatea infecțiilor. Majoritatea specialiștilor îl întâlnesc aproape zilnic și nu își pot imagina diagnosticul final fără el. PCR devine adesea singura reacție pentru identificarea etapelor active ale bolii în acele momente în care alte metode de diagnostic bacteriologice, virologice, imunologice nu funcționează.

Avantajele diagnosticului PCR în medicina modernă:

Detectarea directă a prezenței agentului patogen (și anume, a unei regiuni specifice a ADN-ului sau ARN-ului agentului patogen) în eșantionul studiat.
Specificitatea ridicată vă permite să determinați o bucată unică de ADN sau ARN, caracteristică unui anumit agent patogen, care exclude posibilitatea unor reacții false.
Sensibilitatea ridicată a metodei PCR face posibilă detectarea chiar și a celulelor unice ale agenților patogeni (viruși, bacterii). Sensibilitatea analizei PCR este de 10-1000 de celule în proba de testare (de exemplu, sensibilitatea testelor imunologice și microscopice este de numai 103-105 celule).
Dezvoltarea unei tehnici PCR universale pentru detectarea diferiților agenți patogeni. Obiectul cercetării prin metoda PCR este materialul genetic (ADN, ARN) al agentului patogen. Tehnica vă permite să identificați mai mulți agenți patogeni dintr-o probă biologică.
Obținerea suficient de rapidă a rezultatului analizei. Un studiu complet se efectuează în 4-4,5 ore, mai rar - puțin mai mult.
Posibilitatea detectării agenților patogeni înainte de apariția simptomelor bolii (diagnostic preclinic) și după o boală trecută (diagnostic retrospectiv). Un exemplu de diagnostic preclinic ar fi o examinare în timpul perioadei de incubație (de la momentul infecției până când pacientul se plânge), precum și infecția latentă (când nu există deloc simptome, dar există doar date de laborator - PCR, de exemplu ). Una dintre Puncte importante Diagnosticul PCR este conduita PCR în materialul de arhivă sau în rămășițele biologice, care este importantă pentru identificarea unei persoane sau a paternității.

În prezent, diagnosticul PCR este în curs de dezvoltare semnificativă. Metoda în sine este îmbunătățită, apar noi tipuri de PCR din nou și din nou, noi sisteme de testare pentru această reacție intră pe piața medicală. Datorită acestui fapt, costul studiilor PCR devine mai accesibil pentru o gamă largă de pacienți în fiecare an.

Pe ce se bazează metoda PCR?

Baza reacției în lanț a polimerazei este dublarea multiplă (amplificarea) unei anumite regiuni de ADN sau ARN folosind enzime în laborator. Ca rezultat, se formează acea cantitate de ADN sau ARN, suficientă pentru analiza vizuală. În cursul studiului, se copiază doar acea secțiune care se potrivește condițiilor specificate și numai în situația prezenței acesteia în eșantionul de testare.

De exemplu, materialul pentru cercetare, în care se presupune că există fragmente de ADN sau ARN ale agentului patogen (salivă, sânge, urină, secreții din organele genitale), este plasat într-un reactor special (amplificator). Mai mult, i se adaugă enzime specifice, care se leagă de ADN-ul sau ARN-ul agentului patogen, iar o copie a acestuia este sintetizată. Această copiere are loc în mai multe etape în funcție de tipul „reacției în lanț” și, în cele din urmă, se pot forma sute și mii de copii dintr-un singur exemplar al materialului genetic. Apoi vine analiza și compararea rezultatului cu baza de date disponibilă pe structura diferiților agenți patogeni. Prin intermediul PCR, este posibil nu numai identificarea tipului de agent patogen, ci și obținerea unui rezultat cantitativ al analizei, adică câți agenți patogeni sunt în corpul uman.

Metoda PCR extinde în prezent gama de oportunități de cercetare: introducerea mutațiilor, îmbinarea fragmentelor de ADN și s-a răspândit în medicină, de exemplu, pentru stabilirea paternității, apariția de gene noi etc.

Ce infecții pot fi detectate utilizând diagnosticul PCR

1) Infecția cu HIV (virusul imunodeficienței umane HIV-1 poate fi detectat)
2) Hepatita virală A, B, C, G (ARN-HAV, ADN-HBV, ARN-HCV, ARN-HGV)
3) Mononucleoză infecțioasă (ADN-ul virusului Epstein-Barr-EBV)
4) Infecție cu citomegalovirus (ADN-CMV)
5) Infecție cu herpes (ADN - virusul herpes simplex HSV tip 1 și 2)
6) ITS (infecții cu transmitere sexuală) - ureaplasmoză, gardnereloză, chlamidie, micoplasmoză, tricomonioză,
7) Tuberculoza (Mycobacterium tuberculosis)
8) Viruși oncogeni - infecție cu papilomavirus uman (virusul papilomom uman (inclusiv tipurile sale oncogene 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 și 59)
9) Borrelioză, encefalită transmisă de căpușe
10) Listerioza
11) Candidoza (ciuperci din genul Candida)
12) Infecția cu Helicobacter pylori
alte

Având în vedere gama de agenți patogeni, diagnosticul PCR este utilizat în mod activ în practica ginecologică, urologică, practica unui specialist în boli infecțioase, în pneumologie, ftiziologie, gastroenterologie, hematologie, oncologie și altele.

Material pentru cercetare și regulile de colectare a acestuia

Materialul pentru cercetarea PCR, în care este posibil să se identifice ADN-ul străin al bacteriilor sau ADN-ul sau ARN-ul unui virus, pot fi diverse medii biologice și fluide umane: mucus, urină, sânge, spută, răzuire a celulelor epiteliale, țesuturi placentare, sânge, suc de prostată, lichid amniotic, lichid pleural.

Atunci când se depistează infecțiile cu transmitere sexuală (ITS), descărcarea de la organele genitale, un frotiu sau răzuire din colul uterin, un frotiu sau răzuire din uretra (uretra), urina este luată de la bărbați și femei.

La testarea infecțiilor (infecții cu herpes, CMVI, mononucleoză, toxoplasmoză, hepatită B, C, infecție cu HIV), sângele este luat pentru PCR.

Pentru diagnosticul mononucleozei infecțioase, CMVI, infecției cu herpes, se prelevează un tampon din gât, pentru examinarea CMVI - urină. Adesea pentru examinarea unei leziuni sistem nervosîn mai multe studii, se ia lichid cefalorahidian.

În pneumologie, materialul este spută, lichid pleural.

La examinarea infecțiilor intrauterine - lichid amniotic, țesut placentar.

Pregătirea pentru livrarea de materiale și diagnosticarea PCR

Aproape toți pacienții care sunt supuși diagnosticului PCR au dreptul să se bazeze pe un rezultat fiabil, precis și rapid, în funcție în mare măsură de capacitățile laboratorului și de profesionalismul asistentului de laborator. În același timp, mulți nu cred că această fiabilitate depinde în mare măsură de noi înșine, și anume de recomandările medicului curant, stilul de viață și corectitudinea eșantionării materialului. La eșantionarea materialului, sunt necesare condiții care exclud contaminarea (contaminarea) materialului și, în consecință, pun sub semnul întrebării obiectivitatea analizei.

Pregătirea corectă pentru livrarea materialului nu prezintă dificultăți speciale. Există următoarele recomandări ale medicilor pentru pacienți:

1) să nu trăiască sexual cu o zi înainte de livrarea materialului;
2) sângele pentru cercetare se administrează dimineața pe stomacul gol (nu mâncați, nu beți);
3) la administrarea de urină, prima porție de dimineață este colectată într-un recipient steril și curat.

Condiții de pregătire pentru analiza PCR

Rezultatul final este gata în 1,5-2 zile de la livrarea materialului. În unele cazuri, rezultatul este gata chiar în prima zi.

Decodarea rezultatelor PCR

Negativ rezultatul PCR indică faptul că nu s-au găsit urme de agenți infecțioși în materialul testat la momentul livrării. Majoritatea cazurilor arată absența infecției care a fost încercată să se regăsească în eșantionul testat.

Pozitiv rezultatul PCR indică detectarea urmelor de infecție în proba biologică studiată. Cu o mare precizie, un rezultat pozitiv indică prezența infecției la un moment dat.

Există situații în care PCR este pozitivă, dar este imposibil să vorbim despre o infecție activă - aceasta este așa-numita „trăsură sănătoasă” fără simptome clinice ale bolii, care nu necesită tratament, dar necesită observare dinamică de către un medic. Se observă mai des într-o serie de infecții virale (HPV, CMVI, infecție cu EBV, infecție cu herpes și altele) în materiale precum saliva, răzuirea canalului cervical, uretra, adică dintr-un focus local. Cu toate acestea, nu trebuie să uităm că transmiterea infecției de la purtători oameni sănătoși este posibil, precum și trecerea la forma cronică a bolii cu activarea procesului. Dacă PCR este pozitiv în sânge, atunci acesta nu mai este un purtător și necesită tratament specific.

Rezultatul cantitativ al PCR este evaluat numai de către medic în mod individual pentru o anumită infecție separat și nu are gradații generale. Pe baza rezultatului PCR cantitativ, medicul poate determina gradul de activitate a infecției și poate stabili stadiul bolii, care va afecta cu siguranță cursul și dozele medicamentelor prescrise.

Una dintre ultimele întrebări îngrijorătoare: cât de precisă este diagnosticul PCR?

Există 3 definiții pentru analiza PCR:

1. Acuratețe (cu un grad ridicat de probabilitate, este posibilă detectarea sau absența infecției).
2. Specificitate (acuratețea detectării unei infecții specifice).
3. Sensibilitate (chiar și cu un conținut redus de material genetic al agenților patogeni din proba testată, infecția va fi detectată).

Reacția în lanț a polimerazei practic nu dă rezultate fals pozitive (adică nu există probe pozitive acolo unde nu există infecție). Rezultatele false negative sunt rare (mai des acest lucru se datorează absenței unei infecții active la o persoană în acest moment). De exemplu, infecția latentă, infecție cronicăîn afara activității.

Doctor în boli infecțioase N.I. Bykova

Video despre de ce și cum să faceți un test PCR pentru infecții

Diagnosticul PCR este o tehnică bazată pe utilizarea reacției în lanț a polimerazei, care poate fi utilizată pentru a examina o persoană pentru boli infecțioase și ereditare. Testele PCR pentru 12 infecții arată rezultatul, indiferent dacă boala este acută sau cronică. Unii experți consideră PCR 12 o analiză obligatorie și nu fac un diagnostic final fără aceasta. Rezultatele pot fi pozitive chiar cu mult înainte de apariția simptomelor bolii.

În secolul al XX-lea, Carey Mullis din Statele Unite a descoperit fenomenul reacției în lanț a polimerazei. În prezent, metoda PCR este standardul de aur în unele domenii ale medicinei. Metoda este cea mai eficientă pentru detectarea bolii în stadiul activ, deoarece există cazuri în care în stadiul activ, metodele convenționale nu dau un rezultat atât de precis.

Diagnosticul proceselor infecțioase utilizând PCR este destul de relevant în lumea modernă... Avantajele acestui tip de sondaj sunt următoarele puncte:

1. Detectarea unui agent infecțios în analize. Analiza implică identificarea ADN-ului sau ARN-ului unui agent infecțios.
2. Reacțiile false și eronate sunt practic excluse.
3. Tehnica PCR 12 este cea mai sensibilă. Datorită acestei metode, pot fi detectate chiar și celule unice de agenți infecțioși.
4. Rezultatul PCR pentru agenții patogeni latenți este gata în decurs de 4 ore după procedură.
5. Capacitatea de a detecta agenți infecțioși fără absența simptomelor caracteristice pentru boală. Metoda este destul de eficientă în cazul unei boli specifice.

În lumea modernă, diagnosticul PCR al infecțiilor se dezvoltă într-un ritm accelerat. Tehnica este îmbunătățită activ. Apar noi subspecii ale examinării PCR. Datorită dezvoltării acestei metode de sondaj, devine cât mai accesibilă pentru o gamă largă de oameni, iar costul se schimbă treptat.

Baza reacției în lanț a polimerazei

Metoda PCR se realizează exclusiv în condiții de laborator. Pentru implementarea sa, se folosesc enzime speciale care cresc de mai multe ori structura ADN-ului și ARN-ului pacientului. Cantitatea de ADN și ARN trebuie formată astfel încât să poată fi efectuată analiza vizuală. În timpul examinării, are loc o copie a secțiunii respective de ARN sau ADN, care este ideală pentru condițiile necesare.

Există o bază de date corespunzătoare în laborator, care indică structura exactă a diferiților agenți infecțioși. Datorită metodei PCR, puteți vedea nu numai agentul patogen, ci și calcula raportul cantitativ al acestuia.

Diagnosticul PCR implică, de asemenea, anumite inovații, printre care se pot distinge următoarele:

• introducerea mutațiilor;
• conexiunea fragmentelor de ADN individuale;
• determinarea paternității etc.

Infecții detectate prin PCR

Diagnosticul PCR poate dezvălui următoarele procese infecțioase:

• hepatită din următoarele soiuri: A, B, C, G;
• Virusul Epstein-Barr, agentul cauzal al mononucleozei infecțioase;
• citomegalovirus;
• mycobacterium tuberculosis;
• herpes tipurile 1 și 2;
• multe infecții cu transmitere sexuală: ureaplasmoza, gardnereloza, chlamydia, micoplasmoza, tricomoniaza.
• HPV și subspeciile sale oncogene;
• encefalită și borrelioză transmisă de căpușe;
• infecție candidală;
• listerioză;
• Infecția cu Helicobacter pylori.

Și acestea sunt doar câteva dintre cele mai frecvente infecții care pot fi detectate folosind PCR. Analiza sângelui PCR este utilizată activ în domeniul ginecologic al practicii medicale, precum și în domenii precum:

• pulmonar;
• fiziologic;
• gastroenterologic;
• oncologic;
• multe alte ramuri ale medicinei.

Reguli pentru colectarea materialului pentru analiză

ADN-ul și ARN-ul străin pot fi detectate examinând o varietate de fluide biologice ale unei anumite persoane. Pentru a examina o persoană pentru prezența anumitor infecții cu transmitere sexuală, este necesar să se ia o probă de descărcare de gestiune din organele genitale (frotiu sau răzuire) ale pacientului și din urină.

Dacă devine necesar să se examineze o persoană pentru diferite tipuri de infecții (HIV, herpes, hepatită și altele), atunci se ia o analiză PCR, pentru care se folosește sângele pacientului.

Pentru a diagnostica o leziune herpetică, mononucleoza, trebuie să luați un tampon din gura pacientului. Pentru confirmarea CMVI, urina pacientului este luată pentru analiză. Există cazuri în care lichidul cefalorahidian este examinat pentru a afla cauzele anomaliilor neurologice care au apărut.

În același timp, un pneumolog examinează sputa și lichidul din pleura unui anumit pacient folosind metoda PCR.

Dacă un nou-născut este suspectat de infecție intrauterină, medicii iau o analiză a lichidului amniotic de la femeia însărcinată și a unei bucăți de țesut din placentă.

Livrarea analizei: caracteristici ale procedurii și interpretarea rezultatelor

Toți pacienții examinați prin metoda PCR primesc cel mai fiabil rezultat. În acest caz, apariția erorilor este practic exclusă. Rezultatele acestei analize sunt pregătite suficient de rapid, ceea ce facilitează diagnosticul și asigură numirea la timp a măsurilor terapeutice.

Fiabilitatea rezultatului PCR depinde direct de livrarea corectă a materialului pentru examinare. Materialul nu trebuie contaminat, altfel rezultatul cercetării nu va fi obiectiv. Cele mai importante recomandări înainte de a trece analiza PCR includ următoarele cerințe:

1. Este interzisă expunerea activității sexuale cu o zi înainte de analiză.
2. Un test de sânge pentru infecții trebuie făcut pe stomacul gol dimineața.
3. Urina este prezentată dimineața într-un recipient steril.

Rezultatul analizei va fi gata în 1,5-2 zile după procedura în cauză. Există situații în care rezultatul poate fi pregătit în aceeași zi.

Decodarea rezultatelor

Rezultatul acestui tip de examinare poate fi pozitiv sau negativ. Un rezultat negativ al testului de sânge indică faptul că nu există elemente infecțioase în materialul donat. Un număr mare de analize PCR efectuate arată o analiză negativă.

O analiză PCR pozitivă confirmă faptul că s-au găsit agenți infecțioși în materialul prezentat și că o calitate maximă, maximă tratament eficient bolnav.

Rezultatul poate fi pozitiv, dar nu există manifestări ale bolii. Aceasta indică fie debutul bolii, fie transportul acesteia. Dacă se detectează transportul bolii, atunci nu sunt necesare măsuri terapeutice. Trebuie doar să fii observat de un specialist. Exemple de astfel de boli sunt:

• infecție cu papilomavirus;
• herpes etc.

De obicei, acestea se găsesc în salivă, resturi din canalul cervical, uretra. Cu toate acestea, trebuie amintit că o persoană bolnavă poate infecta persoane absolut sănătoase, în ciuda faptului că această boală nu-l deranjează în niciun fel. Boala poate deveni cronică. Trebuie remarcat faptul că, în cazurile în care testul de sânge PCR a arătat un rezultat pozitiv, numirea măsurilor terapeutice este pur și simplu necesară.

Analiza PCR are, de asemenea, o caracteristică cantitativă. Rezultatul cantitativ este evaluat numai de un specialist; este individual pentru diferite infecții. Pe baza caracteristicilor cantitative, medicul este capabil să înțeleagă cât de activ este un anumit proces patologic, să stabilească stadiul exact al dezvoltării unei boli specifice. Analizând rezultatele obținute, specialistul poate selecta medicamentul necesar și, eventual, poate revizui doza medicamentului.

Precizia diagnosticului PCR

Experții oferă PCR 3 cele mai importante caracteristici, printre care se numără:

1. Precizie.
2. Specificitate.
3. Sensibilitate.

Diagnosticul infecțiilor prin PCR are o mare probabilitate de detectare a agenților infecțioși. Analiza PCR a sângelui și a altor fluide este foarte specifică. Cu ajutorul acestuia, puteți identifica cu ușurință un anumit proces infecțios. Diagnosticul PCR este extrem de sensibil. Dacă materialul testat conține o cantitate minimă de agenți infecțioși, metoda PCR va fi întotdeauna pozitivă.

Cel mai rar este un rezultat fals pozitiv. Dacă nu există infecție, atunci rezultatul este negativ.

PCR pentru procesul infecțios latent

Dacă se suspectează o ITS la o persoană, atunci este prescris un test de sânge pentru infecții latente. Bolile sexuale pot fi detectate numai prin examinarea pacientului. Boli precum:

• chlamydia;
• ureaplasmoza;
• gonoree;
• herpes;
• gardnereloza;
• micoplasma.

Infecțiile genitale de mai sus sunt destul de frecvente și în același timp insidioase. Pe stadiul inițial dezvoltarea bolii, acestea nu dau simptome vii, iar pacienții nu caută ajutor. Analiza PCR a sângelui, resturile de pe membrana mucoasă a uretrei și a canalului cervical sunt necesare dacă sunt suspectate aceste infecții.

ITS au un efect foarte negativ asupra sistemului reproductiv. Ele pot provoca infertilitate sau malformații la făt. În acest sens, înainte de a planifica o sarcină, trebuie să treceți un test PCR.

PCR pentru 12 infecții este populară. Diagnosticul prin metoda PCR 12 se efectuează grație livrării frotiurilor din organele genitale. Materialul este luat la 2 ore după actul de urinare. Cu 2 zile înainte de studiu, supozitoarele și dușurile nu trebuie introduse în vagin. Rezultatul analizei va fi gata în 2 zile.

Costul PCR variază în funcție de infecția investigată. Prețul variază de la 200 la 500 de ruble pentru fiecare infecție. Puteți intra și fi examinat într-un laborator privat pe cont propriu, fără recomandarea medicului.

La sfârșitul articolului, vezi
Reacție în lanț a polimerazei (PCR, PCR) inventat în 1983 de Carey Mullis (om de știință american). Ulterior, a primit Premiul Nobel pentru această invenție. În prezent, diagnosticul PCR este una dintre cele mai exacte și sensibile metode pentru diagnosticarea bolilor infecțioase.
Reacția în lanț a polimerazei (PCR)- o metodă experimentală de biologie moleculară, o modalitate de a crește semnificativ concentrațiile mici de anumite fragmente de acid nucleic (ADN) într-un material biologic (eșantion).
Metoda PCR se bazează pe dublarea multiplă a unei anumite regiuni ADN folosind enzime în condiții artificiale (in vitro). Ca urmare, cantitatea de ADN este acumulată suficientă pentru detectarea vizuală. În acest caz, numai secțiunea care îndeplinește condițiile specificate este copiată și numai dacă este prezentă în eșantionul studiat.
Pe lângă simpla creștere a numărului de copii ADN (acest proces se numește amplificare), PCR permite multe alte manipulări cu material genetic (introducerea mutațiilor, îmbinarea fragmentelor de ADN) și este utilizat pe scară largă în practica biologică și medicală, de exemplu, pentru diagnosticarea bolilor (ereditare, infecțioase), pentru stabilirea paternității, pentru clonarea genelor, introducerea mutațiilor, izolarea genelor noi.

Specificitate și aplicare

Efectuarea PCR

Pentru a efectua PCR în cel mai simplu caz, sunt necesare următoarele componente:

• Șablon ADN care conține regiunea ADN pe care doriți să o amplificați;
• două grunduri complementare capetelor fragmentului dorit;
• ADN polimerază termostabilă;
• trifosfați deoxinucleotidici (A, G, C, T);
• Ioni Mg2 + necesari pentru ca polimeraza să funcționeze;
• soluție tampon.

PCR se efectuează într-un amplificator - un dispozitiv care asigură răcirea și încălzirea periodică a tuburilor, de obicei cu o precizie de cel puțin 0,1 ° C. Pentru a evita evaporarea amestecului de reacție, în eprubetă se adaugă un ulei cu fierbere ridicată, de exemplu, vaselină. Adăugarea de enzime specifice poate crește randamentul reacției PCR.
Progresul reacției

De obicei, atunci când se efectuează PCR, se efectuează 20 până la 35 de cicluri, fiecare dintre acestea constând din trei etape. Șablonul de ADN cu catenă dublă este încălzit la 94 - 96 ° C (sau 98 ° C dacă se folosește o polimerază deosebit de termostabilă) timp de 0,5 - 2 minute pentru a permite firelor de ADN să se separe. Această etapă se numește denaturare - legăturile de hidrogen dintre cele două lanțuri sunt distruse. Uneori, înainte de primul ciclu, amestecul de reacție este preîncălzit timp de 2 - 5 minute pentru a denatura complet șablonul și primerii.
Când firele s-au dispersat, temperatura este redusă astfel încât grundii să se poată lega de șablonul monocatenar. Această etapă se numește recoacere. Temperatura de recoacere depinde de grund și este de obicei aleasă cu 4 - 5 ° C sub punctul lor de topire. Timp de etapă - 0,5 - 2 minute.

ADN polimeraza replică firul șablon folosind un primer ca sămânță. Aceasta este etapa de alungire. Temperatura de alungire depinde de polimerază. Polimerazele utilizate frecvent sunt cele mai active la 72 ° C. Timpul de alungire depinde atât de tipul ADN polimerazei, cât și de lungimea fragmentului amplificat. De obicei, timpul de alungire este luat de un minut pentru fiecare mie de perechi de baze. După sfârșitul tuturor ciclurilor, o etapă suplimentară de alungire finală este adesea efectuată pentru a finaliza construcția tuturor fragmentelor monocatenare. Această etapă durează 10-15 minute.
Pregătirea materialului pentru cercetare și transportarea acestuia la laborator

Pentru o analiză reușită, este important să colectați corect materialul de la pacient și să îl pregătiți corespunzător. Se știe că în diagnosticul de laborator majoritatea erorilor (până la 70%) sunt făcute tocmai în etapa de pregătire a probei. Sistemele de vid sunt utilizate în prezent pentru preluarea sângelui în laboratorul INVITRO, care, pe de o parte, traumatizează minim pacientul și, pe de altă parte, permit preluarea materialului în așa fel încât să nu intre în contact nici cu personalul sau mediu inconjurator... Acest lucru evită contaminarea (contaminarea) materialului și asigură obiectivitatea analizei PCR.

ADN - acidul dezoxiribonucleic este un polimer biologic, unul dintre cele două tipuri de acizi nucleici care asigură stocarea, transmiterea din generație în generație și implementarea programului genetic pentru dezvoltarea și funcționarea organismelor vii. Rolul principal al ADN-ului în celule este stocarea pe termen lung a informațiilor despre structura ARN și a proteinelor.

ARN - acid ribonucleic - este un polimer biologic similar în structură chimică cu ADN-ul. Molecula de ARN este construită din aceleași unități monomerice - nucleotide ca ADN. În natură, ARN-ul există de obicei ca o singură catenă. La unele virusuri, ARN-ul este purtătorul informațiilor genetice. În celulă, joacă un rol important în transferul de informații de la ADN la proteine. ARN-ul este sintetizat pe un șablon de ADN. Acest proces se numește transcriere. Există regiuni în ADN care conțin informații responsabile pentru sinteza a trei tipuri de ARN, care diferă în funcțiile lor: ARN informațional sau AR de mesager (ARNm), ribozomal (ARNr) și transport (ARNt). Toate cele trei tipuri de ARN sunt implicate într-un fel sau altul în sinteza proteinelor. Cu toate acestea, informațiile privind sinteza proteinelor sunt conținute numai în ARNm.

Nucleotidele sunt unitatea principală care se repetă în moleculele de acid nucleic, produsul unui compus chimic cu o bază azotată, un zahăr cu cinci atomi de carbon (pentoză) și una sau mai multe grupări fosfat. Nucleotidele prezentate în acizi nucleici conțin o grupare fosfat. Sunt denumite în funcție de baza azotată pe care o conțin - adenină (A) care conține adenină, guanină (G) - guanină, citozină (C) - citozină, timină (T) - timină, uracil (U) - uracil. ADN-ul conține 4 tipuri de nucleotide - A, T, G, C, ARN conține și 4 tipuri - A, U, G, C. Zaharul din toate nucleotidele ADN este deoxiriboză, ARN-ul este riboză. Când se formează acizi nucleici, nucleotidele, prin legare, formează coloana vertebrală zahăr-fosfat a moleculei, pe o parte a căreia există baze.

Primer - ADN scurt utilizat pentru a replica șablonul șablon. Fiecare dintre grunduri este complementar cu unul dintre firele șablonului cu două fire, încadrând începutul și sfârșitul regiunii amplificate.

1. Glick B., Pasternak J. Biotehnologie moleculară. Principii și aplicații. Pe. din engleza - M.: Mir, 2002. - 589 p., Ill. ISBN 5-03-003328-9
2. Shchelkunov S.N. Inginerie genetică - Novosibirsk: Sib. univ. editura, 2004. - 496 p.; bolnav. ISBN 5-94087-098-8
3. Patrushev L.I. Sisteme genetice artificiale - Moscova: Nauka, 2005 - 2 volume - ISBN 5-02-033278-X

IMPORTANT!

Informațiile din această secțiune nu pot fi utilizate pentru autodiagnosticare și auto-medicare. În caz de durere sau altă exacerbare a bolii, numai medicul curant trebuie să prescrie teste de diagnostic. Pentru un diagnostic și un tratament corect, trebuie să vă adresați medicului dumneavoastră.