Diagnostik PCR untuk berapa hari dilakukan. Analisis dan diagnostik. Pemeriksaan PCR yang komprehensif

Keterangan

Reaksi berantai polimerase (PCR, PCR) ditemukan pada tahun 1983 oleh ahli biokimia Amerika Carey B. Mullis. Pada tahun 1993, ia dianugerahi Hadiah Nobel untuk penemuan ini.

Saat ini, area penerapan PCR sebagai metode modern biologi molekuler sangat luas. Diagnostik PCR mengambil tempat khusus dalam praktik medis. Dan alasannya cukup sederhana: reaksi berantai polimerase membuat hal yang tidak mungkin menjadi mungkin.

Diagnostik PCR sering digambarkan secara kiasan sebagai metode di mana Anda dapat menemukan jarum di tumpukan jerami dan kemudian membangun tumpukan jerami dari jarum-jarum ini. "Jarum" adalah bagian kecil dari materi genetik sel (DNA atau RNA).

Dengan demikian, penemuan metode ini merupakan salah satu perkembangan paling menonjol di bidang biologi molekuler dalam beberapa dekade terakhir. Pengembangan metode PCR memungkinkan diagnostik medis secara keseluruhan naik ke tingkat yang baru secara kualitatif.

Dasar-dasar PCR

Metode ini didasarkan pada penyalinan selektif ganda (amplifikasi) dari wilayah DNA tertentu untuk mendapatkan sejumlah materi genetik yang cukup untuk deteksi visual. Dalam hal ini, hanya bagian tertentu dari DNA yang berulang kali disalin (diperkuat), asalkan ada dalam biomaterial yang dipelajari.

Selain itu, penelitian ini, selain hanya meningkatkan jumlah salinan daerah DNA, memungkinkan manipulasi lain dengan materi genetik. Oleh karena itu, metode ini banyak digunakan dalam penelitian ilmiah, praktik biologis dan medis: dalam diagnosis penyakit menular dan keturunan, dalam mengidentifikasi mutasi, genotipe, menetapkan ayah, identifikasi kepribadian, dll.

PCR dalam diagnosis penyakit menular

Saat ini, diagnosis infeksi PCR adalah salah satu metode laboratorium klinis yang paling akurat, sensitif dan efektif. Selain itu, spektrum patogen yang terdeteksi praktis tidak terbatas - sistem pengujian untuk analisis PCR dari patogen yang diinginkan akan dikembangkan.

Karena sensitivitasnya yang tinggi, PCR memungkinkan pendeteksian patogen bahkan dengan kandungan minimalnya (yaitu, hanya beberapa molekul DNA yang ada dalam biomaterial yang dipelajari).

PCR mendeteksi patogen penyakit menular ketika tidak mungkin dilakukan dengan metode lain (imunologis, budaya, mikroskopis). Oleh karena itu, untuk sejumlah agen infeksi, metode reaksi berantai polimerase telah menjadi "standar emas", telah teruji waktu dan teruji secara klinis. Di modern diagnostik laboratorium penyakit menular PCR adalah metode yang paling sensitif dan spesifik untuk deteksi langsung patogen. Ini memungkinkan tidak hanya untuk menetapkan etiologi penyakit, tetapi juga untuk memantau jalannya proses infeksi dan mengevaluasi keefektifan pengobatan.

Analisis IMS dengan PCR sangat relevan dalam perjalanan tanpa gejala dari proses infeksi yang disebabkan oleh mikroorganisme patogen tanpa syarat (Klamidia, penentuan kualitatif DNA; Mycoplasma, penentuan kualitatif DNA; Agen penyebab gonore, penentuan kualitatif DNA; Agen penyebab trikomoniasis, penentuan kualitatif DNA). Misalnya, dengan gonore kronis pada wanita, bahkan dengan bantuan metode bakteriologis, seringkali tidak mungkin untuk mengidentifikasi gonore, meskipun ada gejala proses inflamasi kronis di serviks atau uretra.

Diagnostik PCR modern memungkinkan tidak hanya untuk mengidentifikasi bahan genetik agen infeksi, tetapi juga untuk menentukan konsentrasi DNA / RNA mereka (format penelitian kuantitatif). Penentuan jumlah patogen memiliki penting dalam memutuskan penunjukan pengobatan, terutama jika mikroorganisme oportunistik diidentifikasi (Mycoplasma, penentuan kuantitatif DNA; Mengetik ureaplasma, penentuan kuantitatif DNA).

Salah satu arahan utama dalam pengembangan metode PCR adalah format "Multiprime" yang dikembangkan dalam CMD, yang memungkinkan untuk mengidentifikasi beberapa patogen dalam satu tabung reaksi (dan satu reaksi).

• Patogen infeksi yang ditularkan oleh kutu ixodid

Diagnosis PCR hepatitis

Saat ini, setidaknya 5 virus diketahui, yang kemampuannya menyebabkan kerusakan hati telah terbukti. Ini adalah agen penyebab hepatitis A, B, C, D, E. Dalam kasus yang jarang terjadi, hepatitis dapat disebabkan oleh virus Epstein-Barr dan herpes simpleks. Kemampuan untuk menginfeksi hati agen seperti TT dan virus hepatitis G tidak diakui oleh semua orang saat ini. Semua virus ini milik keluarga yang berbeda, memiliki sifat biologis yang berbeda dan, karenanya, taktik pengobatan juga akan berbeda secara signifikan tergantung pada etiologi hepatitis.

Mempertimbangkan hal di atas, masalah yang sangat mendesak adalah diagnosis etiologis hepatitis virus yang memadai dengan identifikasi patogen tertentu. Ini tidak mungkin tanpa menggunakan metode biologi molekuler modern. Oleh karena itu, diagnosis hepatitis dengan metode reaksi berantai polimerase merupakan salah satu langkah terpenting dalam menentukan penyebab penyakit dan menentukan taktik pengobatan lebih lanjut.

PCR dalam diagnosis infeksi HIV

Saat ini, pendekatan yang paling mudah diakses dan pada saat yang sama sensitif digunakan untuk diagnosis laboratorium infeksi HIV - deteksi antibodi terhadap HIV dalam darah menggunakan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), diikuti dengan konfirmasi hasil positif dari analisis dengan immunoblotting (IB). Efisiensi pendeteksian orang yang terinfeksi HIV menggunakan pendekatan ini bisa mencapai 99% atau lebih.

Tetapi diagnosis serologis infeksi HIV memiliki sejumlah keterbatasan:

1. Inefisiensi selama periode yang disebut. "Jendela serologis" (pada minggu-minggu pertama setelah infeksi, antibodi tidak terdeteksi karena tidak adanya atau konsentrasinya rendah).
2. antibodi HIV lama terdeteksi pada semua anak yang lahir dari ibu yang terinfeksi HIV.
3. Hasil ELISA positif palsu karena adanya antibodi dalam darah terhadap antigen yang mirip dengan antigen HIV.
4. Hasil negatif palsu dan meragukan dari ELISA dan imunoblotting (terutama pada pasien dengan tahap terminal penyakit).

Oleh karena itu, tes PCR untuk pengujian infeksi HIV semakin banyak digunakan saat ini. Berdasarkan " Rekomendasi metodis tentang tes infeksi HIV "(disetujui oleh Kementerian Kesehatan dan Pembangunan Sosial Federasi Rusia pada 08/06/2007)" jika ada kriteria epidemiologis yang menunjukkan risiko infeksi HIV baru-baru ini untuk pasien dan, pada saat yang sama, mungkin hasil positif palsu atau negatif palsu pada ELISA dan IB, misalnya, saat memeriksa anak, lahir dari ibu yang terinfeksi HIV, atau pasien dalam periode "jendela seronegatif", metode PCR digunakan, di mana materi gen HIV terdeteksi ... .. ". Dan dalam kasus diagnosis infeksi HIV yang sudah ditetapkan, analisis PCR digunakan untuk prognosis, pengamatan dinamis dan pemantauan terapi.

• Penentuan kualitatif human immunodeficiency virus DNA provirus, PCR
• Penentuan kuantitatif human immunodeficiency virus RNA, PCR
• Diagnostik komprehensif: penentuan kualitatif RNA virus hepatitis C / DNA virus hepatitis B / human immunodeficiency virus (HIV) tipe 1 dan 2 RNA

Di Center for Molecular Diagnostics (CMD), Anda dapat melakukan tes PCR HIV secara anonim.

Reaksi berantai polimerase telah dikenal selama 30 tahun. Ini banyak digunakan di banyak bidang, dari arkeologi hingga genetika. Ini adalah metode PCR yang membantu menentukan paternitas, tetapi paling sering digunakan untuk mengidentifikasi berbagai penyakit menular dalam tubuh manusia. Apa itu analisis PCR?

Ini tidak lebih dari tiruan dari proses penggandaan DNA, sebagai akibatnya sejumlah besar molekul identik diperoleh dari fragmen kecil molekul DNA untuk beberapa waktu (biasanya beberapa jam), yang sudah dapat dipelajari. Apakah itu mengingatkan Anda pada sesuatu? Sangat mirip dengan kloning. Ini adalah reaksi berantai polimerase yang merupakan dasar dari kloning dan digunakan dalam reproduksi jaringan dalam kondisi laboratorium. Nah, di bidang kedokteran, analisis PCR digunakan untuk mendeteksi bakteri dalam tubuh manusia (mikoplasma,,, serta patogen dan), virus (dan papillomavirus), jamur (patogen) dan protozoa (Trichomonas).

Metode diagnostik molekuler patogen infeksius ini adalah yang paling sensitif. Memungkinkan untuk mendeteksi bahkan satu fragmen DNA dalam sampel, metode PCR praktis tidak memiliki batas sensitivitas. Dan dalam kebanyakan kasus, hasilnya menunjukkan akurasi 100%, terutama saat mendiagnosis infeksi bakteri. Dia tidak pernah memberikan positif palsu.

Ini juga universal, karena memungkinkan Anda untuk secara bersamaan mengidentifikasi beberapa mikroorganisme dalam satu sampel, sementara metode bakteriologis digunakan cara yang berbeda budidaya untuk berbagai kelompok patogen. Selain itu, PCR sangat menyederhanakan tugas peneliti, mengurangi waktu pengujian menjadi 24 jam dan menyederhanakan persyaratan pengangkutan sampel. Jika bahan untuk metode bakteriologis dan virologis harus hidup, maka apapun yang mengandung DNA cocok untuk metode PCR, bahkan sel-sel mati.

Analisis PCR untuk infeksi sangat penting karena kebanyakan dari mereka, mempengaruhi tubuh manusia, berkembang tanpa gejala atau memiliki gejala yang serupa. Misalnya, metode PCR banyak digunakan untuk mengidentifikasi penyebab penyakit hati, termasuk A, B, C, D, E, serta virus herpes simpleks. Untuk memerangi masing-masing virus, perlu menerapkan taktik pengobatan yang sama sekali berbeda. Oleh karena itu, untuk penunjukan terapi yang efektif dokter perlu mengidentifikasi patogen secara akurat. Dan jika Anda melakukan penelitian yang berkepanjangan, infeksi dapat menjadi kronis, menyebabkan komplikasi yang sangat berbahaya selama kehamilan atau penyakit penyerta lainnya. Dan metode PCR inilah yang menjadi penolong utama dalam diagnosa yang cepat dan akurat.

Tetapi di sini Anda perlu memahami bahwa sebagai satu-satunya metode untuk mendeteksi beberapa mikroorganisme (misalnya, mikoplasma), PCR mungkin tidak cocok untuk yang lain (stafilokokus, streptokokus, dll.) Oleh karena itu, seorang spesialis harus memilih metode diagnostik dan meresepkan pengobatan. Anda tidak boleh pergi ke laboratorium sendirian dan melakukan semua analisis secara berurutan. Mereka bisa sama sekali tidak berguna. Dan di klinik swasta, atas permintaan Anda dan untuk uang Anda, mereka akan melakukan analisis apa pun untuk Anda, bahkan tanpa bertanya mengapa Anda membutuhkannya.

Bagaimana tes PCR diambil

Untuk melakukan penelitian dengan metode PCR, cairan biologis dan sekresi tubuh manusia digunakan, yang mungkin mengandung mikroba dan fragmennya. Ini termasuk: darah, air liur, dahak, dan urin. Selain itu, untuk analisis PCR, kerokan sel epitel selaput lendir uretra dan saluran serviks diambil. Misalnya, darah diambil dari vena untuk mendeteksi HIV dan hepatitis. Untuk mendiagnosis infeksi pada organ genital, keluarnya cairan dari alat kelamin, apusan dari serviks atau uretra dianalisis. Dan untuk mendiagnosis mononukleosis menular, usap tenggorokan digunakan.

Persiapan untuk analisis PCR

Sebelum mengambil analisis, Anda perlu berkonsultasi dengan dokter Anda dan dengan hati-hati mengikuti rekomendasinya. Tanyakan kepada dokter jenis bahan apa yang akan diambil untuk penelitian. Tes darah PCR dilakukan dengan perut kosong. Namun sebelum menjalani tes PCR berupa kerokan sel epitel, dokter menganjurkan pasien minum bir di malam hari, pergi ke pemandian dan berhubungan seks. Kedengarannya aneh, tetapi semua ini mengaktifkan infeksi pada alat kelamin, yang dapat terjadi dalam bentuk yang sangat ringan, dan membantu mengidentifikasinya.

Decoding analisis PCR

Hasil analisis PCR bisa positif dan negatif. Ini selalu dicatat dalam dokumen, yang harus dikeluarkan di laboratorium tanpa gagal. Hasil positif berarti DNA infeksi ditemukan dalam bahan biologis yang disumbangkan pasien. Hasil negatif berarti tidak ada infeksi pada tubuh manusia.

Karena metode PCR sangat sensitif, metode ini harus digunakan dengan sangat hati-hati untuk memantau efektivitas pengobatan dan hanya beberapa minggu setelah terapi. Bagaimanapun, bahkan fragmen DNA dari patogen yang mati akan memberikan hasil tes PCR yang positif.

Reaksi berantai polimerase membantu dokter mendiagnosis infeksi yang terjadi di tubuh manusia dalam bentuk laten, mencegah perkembangannya dan kerusakan parah organ dalam... Hati-hati memantau kesehatan Anda dan pada kecurigaan pertama infeksi Anda, hubungi dokter Anda.

Reaksi berantai polimerase (PCR) adalah metode diagnostik genetik molekuler dengan presisi tinggi, yang memungkinkan pendeteksian berbagai penyakit menular dan keturunan pada manusia, baik dalam tahap akut maupun kronis, dan jauh sebelum penyakit tersebut dapat bermanifestasi.

Reaksi berantai polimerase (PCR) dikembangkan pada tahun 1983 oleh Carey Mullis (AS), di mana ia dianugerahi Hadiah Nobel Kimia pada tahun 1993.

Analisis PCR telah menjadi semacam "standar emas" untuk sebagian besar infeksi. Kebanyakan spesialis menghadapinya hampir setiap hari dan tidak dapat membayangkan membuat diagnosis akhir tanpanya. PCR sering menjadi satu-satunya reaksi untuk mengidentifikasi tahap aktif penyakit pada saat-saat ketika metode diagnostik bakteriologis, virologis, imunologis lainnya tidak berfungsi.

Keuntungan diagnostik PCR dalam pengobatan modern:

Deteksi langsung keberadaan patogen (yaitu, wilayah spesifik DNA atau RNA patogen) dalam sampel yang diteliti.
Spesifisitas tinggi memungkinkan Anda untuk menentukan bagian unik DNA atau RNA, karakteristik patogen tertentu, yang mengecualikan kemungkinan reaksi palsu.
Sensitivitas tinggi dari metode PCR memungkinkan untuk mendeteksi bahkan sel tunggal patogen (virus, bakteri). Sensitivitas analisis PCR adalah 10-1000 sel dalam sampel uji (misalnya sensitivitas tes imunologi dan mikroskopis hanya 103-105 sel).
Pengembangan teknik PCR universal untuk mendeteksi berbagai patogen. Objek penelitian dengan metode PCR adalah materi genetik (DNA, RNA) patogen. Teknik ini memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi beberapa patogen dari satu sampel biologis.
Cukup cepat mendapatkan hasil analisis. Studi lengkap dilakukan dalam 4-4,5 jam, lebih jarang sedikit lebih lama.
Kemungkinan mendeteksi patogen sebelum timbulnya gejala penyakit (diagnosis praklinis) dan setelah penyakit sebelumnya (diagnosis retrospektif). Contoh diagnostik praklinis adalah pemeriksaan selama masa inkubasi (dari saat infeksi hingga timbulnya keluhan pasien), serta infeksi laten (ketika tidak ada gejala sama sekali, tetapi hanya ada data laboratorium - PCR, Misalnya). Satu dari poin penting Diagnostik PCR adalah pelaksanaan PCR dalam bahan arsip atau sisa-sisa biologis, yang penting untuk mengidentifikasi seseorang atau ayah.

Saat ini, diagnostik PCR sedang mengalami perkembangan yang signifikan. Metode itu sendiri sedang diperbaiki, varietas baru PCR muncul lagi dan lagi, sistem pengujian baru untuk reaksi ini memasuki pasar medis. Berkat ini, biaya studi PCR menjadi lebih terjangkau untuk berbagai pasien setiap tahun.

Berdasarkan apa metode PCR?

Dasar reaksi berantai polimerase adalah penggandaan ganda (amplifikasi) dari daerah tertentu DNA atau RNA menggunakan enzim dalam kondisi laboratorium. Akibatnya, jumlah DNA atau RNA yang terbentuk, cukup untuk analisis visual. Selama penelitian, hanya bagian itu yang disalin yang sesuai dengan kondisi yang diberikan, dan hanya dalam situasi kehadirannya dalam sampel uji.

Misalnya, bahan penelitian yang diduga terdapat fragmen DNA atau RNA patogen (air liur, darah, urin, sekret alat kelamin), ditempatkan dalam reaktor khusus (penguat). Selanjutnya, enzim spesifik ditambahkan ke dalamnya, yang mengikat DNA atau RNA patogen, dan salinannya disintesis. Penyalinan ini berlangsung dalam beberapa tahap sesuai dengan jenis "reaksi berantai", dan akhirnya ratusan dan ribuan salinan dapat dibentuk dari satu salinan materi genetik. Kemudian muncul analisis dan perbandingan hasil dengan database yang tersedia pada struktur berbagai patogen. Melalui PCR, dimungkinkan tidak hanya untuk mengidentifikasi jenis patogen, tetapi juga untuk memberikan hasil analisis kuantitatif, yaitu berapa banyak patogen dalam tubuh manusia.

Metode PCR saat ini memperluas jangkauan peluang penelitian: pengenalan mutasi, penyambungan fragmen DNA, dan telah menyebar luas dalam kedokteran, misalnya, untuk menetapkan paternitas, munculnya gen baru, dll.

Infeksi apa yang dapat dideteksi menggunakan diagnostik PCR

1) Infeksi HIV (Human Immunodeficiency Virus HIV-1 dapat dideteksi)
2) Virus hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Mononukleosis menular (DNA Virus Epstein-Barr-VEB)
4) Infeksi sitomegalovirus (DNA-CMV)
5) Infeksi herpes (DNA – virus herpes simpleks HSV tipe 1 dan 2)
6) IMS (infeksi menular seksual) - ureaplasmosis, gardnerellosis, klamidia, mikoplasmosis, trikomoniasis,
7) Tuberkulosis (Mycobacterium tuberculosis)
8) Virus onkogenik - infeksi human papillomavirus (human papillomavirus (termasuk tipe onkogenik 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, dan 59)
9) Borreliosis, ensefalitis tick-borne
10) Listeriosis
11) Kandidiasis (jamur dari genus Candida)
12) Infeksi Helicobacter pylori
lainnya

Mengingat berbagai patogen, diagnostik PCR secara aktif digunakan dalam praktik ginekologi, urologi, praktik spesialis penyakit menular, dalam pulmonologi, fisiologi, gastroenterologi, hematologi, onkologi, dan lainnya.

Bahan untuk penelitian dan aturan pengumpulannya

Bahan untuk penelitian PCR, yang memungkinkan untuk mengidentifikasi DNA asing bakteri atau DNA atau RNA virus, dapat berupa berbagai media biologis dan cairan manusia: lendir, urin, darah, sputum, kerokan sel epitel, jaringan plasenta, darah, jus prostat, cairan ketuban, cairan pleura.

Saat skrining untuk infeksi menular seksual (IMS), keluarnya cairan dari alat kelamin, apusan atau kerokan dari leher rahim, apusan atau kerokan dari uretra (uretra), urin diambil dari pria dan wanita.

Saat menguji infeksi (infeksi herpes, CMVI, mononukleosis, toksoplasmosis, hepatitis B, C, infeksi HIV), darah diambil untuk PCR.

Untuk mendiagnosis infeksi mononukleosis, CMVI, infeksi herpes, diambil swab dari tenggorokan, dan urin diambil untuk pemeriksaan CMVI. Seringkali untuk pemeriksaan lesi sistem saraf dalam sejumlah penelitian, cairan serebrospinal diambil.

Dalam pulmonologi, bahannya adalah sputum, cairan pleura.

Saat memeriksa infeksi intrauterin - cairan ketuban, jaringan plasenta.

Persiapan pengiriman material dan diagnostik PCR

Hampir semua pasien yang menjalani diagnosa PCR memiliki hak untuk mengandalkan hasil yang dapat diandalkan, akurat dan cepat, yang sebagian besar tergantung pada kemampuan laboratorium dan profesionalisme asisten laboratorium. Pada saat yang sama, banyak yang tidak berpikir bahwa keandalan ini sangat tergantung pada diri kita sendiri, yaitu, pada rekomendasi dokter yang merawat, gaya hidup, dan ketepatan pengambilan sampel bahan. Saat mengambil sampel bahan, diperlukan kondisi yang mengecualikan kontaminasi (kontaminasi) bahan dan, karenanya, mempertanyakan objektivitas analisis.

Persiapan yang benar untuk penyampaian materi tidak terlalu sulit. Berikut rekomendasi dokter untuk pasien:

1) tidak hidup secara seksual sehari sebelum pengiriman materi;
2) darah untuk penelitian diberikan pada pagi hari dengan perut kosong (tidak makan, tidak minum);
3) saat memberikan urin, porsi pagi pertama dikumpulkan dalam wadah yang bersih dan steril.

Waktu kesiapan analisis PCR

Hasil akhir siap dalam 1,5-2 hari setelah pengiriman materi. Dalam beberapa kasus, hasilnya sudah siap pada hari pertama.

Decoding hasil PCR

Negatif hasil PCR menunjukkan bahwa tidak ada jejak agen infeksi yang ditemukan dalam bahan uji pada saat pengiriman. Sebagian besar kasus menunjukkan tidak adanya infeksi yang coba ditemukan dalam sampel uji.

Positif hasil PCR menunjukkan deteksi jejak infeksi pada sampel biologis yang diteliti. Dengan akurasi tinggi, hasil positif menunjukkan adanya infeksi pada waktu tertentu.

Ada situasi ketika PCR positif, tetapi tidak mungkin untuk berbicara tentang infeksi aktif - inilah yang disebut "kereta sehat" tanpa gejala klinis penyakit, yang tidak memerlukan perawatan, tetapi memerlukan pengamatan dinamis oleh dokter. Ini diamati lebih sering pada sejumlah infeksi virus (HPV, CMVI, infeksi EBV, infeksi herpes, dan lain-lain) dalam bahan seperti air liur, gesekan saluran serviks, uretra, yaitu dari fokus lokal. Namun, kita tidak boleh lupa bahwa penularan infeksi dari pembawa orang sehat adalah mungkin, sedapat mungkin, transisi ke bentuk penyakit kronis dengan aktivasi proses. Jika PCR positif dalam darah, maka ini tidak lagi menjadi pembawa dan memerlukan perawatan khusus.

Hasil kuantitatif PCR hanya dinilai oleh dokter secara individual untuk infeksi tertentu secara terpisah dan tidak memiliki gradasi umum. Berdasarkan hasil PCR kuantitatif, dokter dapat menentukan tingkat aktivitas infeksi dan menentukan stadium penyakit, yang tentunya akan mempengaruhi perjalanan dan dosis obat yang diresepkan.

Salah satu pertanyaan terakhir yang mengkhawatirkan: seberapa akurat diagnostik PCR?

Ada 3 definisi untuk analisis PCR:

1. Akurasi (dengan kemungkinan tingkat tinggi, deteksi atau tidak adanya infeksi dimungkinkan).
2. Spesifisitas (keakuratan mendeteksi infeksi tertentu).
3. Sensitivitas (bahkan dengan kandungan bahan genetik patogen yang rendah dalam sampel uji, infeksi akan terdeteksi).

Reaksi berantai polimerase praktis tidak memberikan hasil positif palsu (yaitu, tidak ada sampel positif di mana tidak ada infeksi). Hasil negatif palsu jarang terjadi (lebih sering ini karena tidak adanya infeksi aktif pada seseorang saat ini). Misalnya, infeksi laten, infeksi kronis keluar dari aktivitas.

Dokter penyakit menular N.I. Bykova

Video tentang mengapa dan bagaimana melakukan tes PCR untuk infeksi

Diagnostik PCR adalah teknik yang didasarkan pada penggunaan reaksi berantai polimerase, yang dapat digunakan untuk memeriksa seseorang untuk penyakit menular dan keturunan. Tes PCR untuk 12 infeksi menunjukkan hasilnya, terlepas dari apakah penyakitnya akut atau kronis. Beberapa ahli menganggap PCR 12 sebagai analisis wajib dan tidak membuat diagnosis akhir tanpanya. Hasilnya bisa positif bahkan jauh sebelum timbulnya gejala penyakit.

Pada abad ke-20, Carey Mullis dari Amerika Serikat menemukan fenomena reaksi berantai polimerase. Saat ini, metode PCR merupakan standar emas di beberapa bidang kedokteran. Metode ini paling efektif untuk mendeteksi penyakit pada stadium aktif, karena ada kasus pada stadium aktif, metode konvensional tidak memberikan hasil yang akurat.

Diagnosis proses infeksi menggunakan PCR cukup relevan dalam dunia modern... Keuntungan dari jenis survei ini adalah poin-poin berikut:

1. Deteksi agen infeksi dalam analisis. Analisis melibatkan identifikasi DNA atau RNA dari agen infeksi.
2. Reaksi yang salah dan salah praktis dikecualikan.
3. Teknik PCR 12 adalah yang paling sensitif. Berkat metode ini, bahkan sel tunggal agen infeksi dapat dideteksi.
4. Hasil PCR untuk patogen laten siap 4 jam setelah prosedur.
5. Kemampuan untuk mendeteksi agen infeksi tanpa adanya gejala khas penyakit. Cara tersebut cukup efektif jika terjadi penyakit tertentu.

Di dunia modern, diagnosa PCR infeksi berkembang dengan kecepatan yang dipercepat. Teknik ini sedang ditingkatkan secara aktif. Subspesies baru pemeriksaan PCR muncul. Berkat pengembangan metode survei ini, metode ini dapat diakses sebanyak mungkin oleh banyak orang, dan biayanya berubah secara bertahap.

Dasar dari reaksi berantai polimerase

Metode PCR dilakukan secara eksklusif dalam kondisi laboratorium. Untuk implementasinya, digunakan enzim khusus yang meningkatkan beberapa kali struktur DNA dan RNA pasien. Jumlah DNA dan RNA harus dibentuk agar analisis visual dapat dilakukan. Selama pemeriksaan, salinan bagian RNA atau DNA itu terjadi, yang idealnya sesuai dengan kondisi yang diperlukan.

Ada database yang sesuai di laboratorium, yang menunjukkan struktur yang tepat dari berbagai agen infeksi. Berkat metode PCR, Anda tidak hanya dapat melihat patogen, tetapi juga menghitung rasio kuantitatifnya.

Diagnostik PCR juga melibatkan inovasi tertentu, di antaranya dapat dibedakan sebagai berikut:

• pengenalan mutasi;
• koneksi fragmen DNA individu;
• penentuan ayah, dll.

Infeksi yang dapat dideteksi PCR

Diagnostik PCR dapat mengungkapkan proses infeksi berikut:

• hepatitis dari varietas berikut: A, B, C, G;
• Virus Epstein-Barr, agen penyebab mononukleosis menular;
• sitomegalovirus;
• mikobakterium tuberkulosis;
• herpes tipe 1 dan 2;
• banyak infeksi menular seksual: ureaplasmosis, gardnerellosis, klamidia, mikoplasmosis, trikomoniasis.
• HPV dan subspesies onkogeniknya;
• ensefalitis dan borreliosis yang ditularkan melalui kutu;
• infeksi kandida;
• listeriosis;
• Infeksi Helicobacter pylori.

Dan ini hanya beberapa infeksi paling umum yang dapat dideteksi menggunakan PCR. Analisis darah PCR secara aktif digunakan di bidang praktik medis ginekologi, serta di bidang-bidang seperti:

• paru-paru;
• phthisiatrik;
• gastroenterologis;
• onkologis;
• banyak cabang kedokteran lainnya.

Aturan untuk mengumpulkan bahan untuk analisis

DNA dan RNA asing dapat dideteksi dengan memeriksa berbagai cairan biologis orang tertentu. Untuk memeriksa seseorang untuk mengetahui adanya infeksi menular seksual tertentu, perlu untuk mengambil sampel cairan dari organ genital (kotoran atau goresan) pasien dan urinnya.

Jika ada kebutuhan untuk memeriksa seseorang untuk berbagai jenis infeksi (HIV, herpes, hepatitis dan lain-lain), maka analisis PCR diambil, yang digunakan darah pasien.

Untuk mendiagnosis lesi herpes, mononukleosis, Anda perlu mengambil swab dari mulut pasien. Untuk mengkonfirmasi CMVI, urin pasien diambil untuk dianalisis. Ada kasus ketika cairan serebrospinal diperiksa untuk mengetahui penyebab kelainan neurologis yang muncul.

Pada saat yang sama, seorang ahli paru memeriksa dahak dan cairan dari pleura pasien tertentu menggunakan metode PCR.

Jika bayi yang baru lahir dicurigai mengalami infeksi intrauterin, dokter mengambil analisis cairan ketuban dari wanita hamil dan sepotong jaringan dari plasenta.

Penyampaian analisis: fitur prosedur dan interpretasi hasil

Semua pasien yang diperiksa dengan metode PCR menerima hasil yang paling dapat diandalkan. Dalam hal ini, terjadinya kesalahan praktis dikecualikan. Hasil analisis ini disiapkan dengan cukup cepat, yang memfasilitasi diagnosis dan memastikan penunjukan tindakan terapeutik yang tepat waktu.

Keandalan hasil PCR secara langsung tergantung pada penyampaian materi yang benar untuk pemeriksaan. Bahan tidak boleh terkontaminasi, jika tidak maka hasil penelitian tidak akan objektif. Rekomendasi terpenting sebelum lulus analisis PCR meliputi persyaratan berikut:

1. Dilarang menunjukkan aktivitas seksual sehari sebelum analisis.
2. Tes darah untuk infeksi harus dilakukan dengan perut kosong di pagi hari.
3. Urine diserahkan pada pagi hari dalam wadah steril.

Hasil analisis akan siap dalam 1,5-2 hari setelah prosedur yang bersangkutan. Ada situasi di mana hasilnya dapat disiapkan pada hari yang sama.

Menguraikan hasil

Hasil pemeriksaan jenis ini bisa positif atau negatif. Hasil tes darah negatif menunjukkan bahwa tidak ada unsur infeksius dalam bahan yang disumbangkan. Sejumlah besar dilakukan analisis PCR menunjukkan analisis negatif.

Analisis PCR positif menegaskan fakta bahwa agen infeksi ditemukan dalam bahan yang dikirimkan dan bahwa bahan yang dikirim berkualitas tinggi, maksimum pengobatan yang efektif sakit.

Hasilnya mungkin positif, tetapi tidak ada tanda-tanda penyakit. Ini menunjukkan awal penyakit, atau tentang pembawaannya. Jika pembawa penyakit terdeteksi, maka tidak diperlukan tindakan terapeutik. Anda hanya perlu diawasi oleh spesialis. Contoh penyakit tersebut adalah:

• infeksi virus papiloma;
• herpes, dll.

Biasanya mereka ditemukan dalam air liur, kerokan dari saluran serviks, uretra. Namun, harus diingat bahwa orang yang sakit dapat menginfeksi orang yang benar-benar sehat, terlepas dari kenyataan bahwa penyakit ini sama sekali tidak mengganggunya. Penyakit ini bisa menjadi kronis. Perlu dicatat bahwa dalam kasus di mana tes darah PCR menunjukkan hasil positif, penunjukan tindakan terapeutik hanya diperlukan.

Analisis PCR juga memiliki karakteristik kuantitatif. Hasil kuantitatif dinilai hanya oleh spesialis, itu adalah individu untuk infeksi yang berbeda. Berdasarkan karakteristik kuantitatif, dokter dapat memahami seberapa aktif proses patologis yang diberikan, untuk menentukan tahap perkembangan penyakit tertentu yang tepat. Dengan menganalisis hasil yang diperoleh, spesialis dapat memilih obat yang diperlukan dan, mungkin, merevisi dosis obat.

Akurasi diagnostik PCR

Para ahli memberikan PCR 3 karakteristik terpenting, di antaranya adalah:

1. Ketepatan.
2. Kekhususan.
3. Kepekaan.

Diagnosis infeksi dengan PCR memiliki probabilitas tinggi untuk mendeteksi agen infeksi. Analisis PCR darah dan cairan lain sangat spesifik. Dengan bantuannya, Anda dapat dengan mudah mengidentifikasi proses infeksi tertentu. Diagnostik PCR sangat sensitif. Jika bahan uji mengandung jumlah minimum agen infeksi, metode PCR akan selalu positif.

Yang paling jarang adalah hasil positif palsu. Jika tidak ada infeksi, maka hasilnya negatif.

PCR untuk proses infeksi laten

Jika IMS dicurigai pada seseorang, maka tes darah untuk infeksi laten ditentukan. Penyakit seksual hanya dapat dideteksi dengan memeriksa pasien. Penyakit seperti:

• klamidia;
• ureaplasmosis;
• gonorea;
• herpes;
• gardnerellosis;
• mikoplasma.

Infeksi genital di atas cukup umum dan pada saat yang sama berbahaya. Pada tahap awal perkembangan penyakit, mereka tidak memberikan gejala yang jelas, dan pasien tidak mencari bantuan. Analisis PCR darah, kerokan dari selaput lendir uretra dan saluran serviks diperlukan jika infeksi ini dicurigai.

IMS memiliki efek yang sangat negatif pada sistem reproduksi. Mereka dapat menyebabkan infertilitas atau malformasi pada janin. Dalam hal ini, sebelum merencanakan kehamilan, Anda harus lulus tes PCR.

PCR untuk 12 infeksi sangat populer. Diagnosis dengan PCR 12 dilakukan melalui pengiriman apusan dari alat kelamin. Bahannya diambil 2 jam setelah tindakan buang air kecil. 2 hari sebelum penelitian, supositoria dan douching tidak boleh dimasukkan ke dalam vagina. Hasil analisis akan siap dalam 2 hari.

Biaya PCR bervariasi tergantung pada infeksi yang diselidiki. Harganya berkisar antara 200 hingga 500 rubel untuk setiap infeksi. Anda dapat masuk dan diperiksa di laboratorium swasta sendiri, tanpa rujukan dokter.

Di akhir artikel, lihat
Reaksi berantai polimerase (PCR, PCR) ditemukan pada tahun 1983 oleh Carey Mullis (ilmuwan Amerika). Selanjutnya, ia menerima Hadiah Nobel untuk penemuan ini. Saat ini, diagnostik PCR adalah salah satu metode yang paling akurat dan sensitif untuk mendiagnosis penyakit menular.
Reaksi berantai polimerase (PCR)- metode eksperimental biologi molekuler, cara untuk secara signifikan meningkatkan konsentrasi kecil dari fragmen asam nukleat (DNA) tertentu dalam bahan biologis (sampel).
Metode PCR didasarkan pada penggandaan ganda dari wilayah DNA tertentu menggunakan enzim dalam kondisi buatan (in vitro). Akibatnya, jumlah DNA yang terakumulasi cukup untuk deteksi visual. Dalam hal ini, hanya bagian yang memenuhi kondisi tertentu yang disalin, dan hanya jika ada dalam sampel yang diteliti.
Selain hanya meningkatkan jumlah salinan DNA (proses ini disebut amplifikasi), PCR memungkinkan banyak manipulasi lain dengan materi genetik (pengenalan mutasi, penyambungan fragmen DNA), dan banyak digunakan dalam praktik biologis dan medis, misalnya, untuk diagnosis penyakit (keturunan, menular) , untuk menetapkan ayah, untuk kloning gen, memperkenalkan mutasi, mengisolasi gen baru.

Kekhususan dan aplikasi

Melaksanakan PCR

Untuk melakukan PCR dalam kasus yang paling sederhana, komponen berikut diperlukan:

• Templat DNA yang mengandung wilayah DNA yang akan diamplifikasi;
• dua primer yang melengkapi ujung fragmen yang diinginkan;
• DNA polimerase termostabil;
• deoksinukleotida trifosfat (A, G, C, T);
• Ion Mg2 + yang dibutuhkan agar polimerase dapat bekerja;
• larutan penyangga.

PCR dilakukan dalam amplifier - perangkat yang menyediakan pendinginan dan pemanasan tabung secara berkala, biasanya dengan akurasi setidaknya 0,1 ° C. Untuk menghindari penguapan campuran reaksi, minyak dengan titik didih tinggi, misalnya, vaselin, ditambahkan ke dalam tabung reaksi. Penambahan enzim tertentu dapat meningkatkan hasil reaksi PCR.
Kemajuan reaksi

Biasanya, saat melakukan PCR, dilakukan 20 hingga 35 siklus, yang masing-masing terdiri dari tiga tahap. Template DNA untai ganda dipanaskan hingga 94 - 96 ° C (atau 98 ° C jika polimerase termostabil digunakan) selama 0,5 - 2 menit untuk memungkinkan untai DNA terpisah. Tahap ini disebut denaturasi - ikatan hidrogen antara dua rantai dihancurkan. Kadang-kadang, sebelum siklus pertama, campuran reaksi dipanaskan selama 2 - 5 menit untuk mendenaturasi template dan primer sepenuhnya.
Ketika untaian telah divergen, suhu diturunkan sehingga primer dapat mengikat template untai tunggal. Tahap ini disebut annealing. Suhu anil tergantung pada primer dan biasanya dipilih 4 - 5 ° C di bawah titik lelehnya. Waktu panggung - 0,5 - 2 menit.

DNA polimerase mereplikasi untai cetakan menggunakan primer sebagai benih. Ini adalah tahap elongasi. Suhu perpanjangan tergantung pada polimerase. Polimerase yang sering digunakan paling aktif pada 72 ° C. Waktu pemanjangan tergantung pada jenis DNA polimerase dan panjang fragmen yang diamplifikasi. Biasanya, waktu pemanjangan diambil menjadi satu menit untuk setiap seribu pasangan basa. Setelah akhir semua siklus, tahap tambahan perpanjangan akhir sering dilakukan untuk menyelesaikan konstruksi semua fragmen beruntai tunggal. Tahap ini berlangsung 10-15 menit.
Mempersiapkan bahan untuk penelitian dan membawanya ke laboratorium

Untuk analisis yang berhasil, penting untuk mengumpulkan bahan dari pasien dengan benar dan mempersiapkannya dengan benar. Diketahui bahwa dalam diagnostik laboratorium sebagian besar kesalahan (hingga 70%) dibuat tepat pada tahap persiapan sampel. Untuk pengambilan darah di laboratorium INVITRO, sistem vakum saat ini digunakan, yang, di satu sisi, meminimalkan trauma pada pasien, dan di sisi lain, memungkinkan pengambilan sampel bahan sedemikian rupa sehingga dia tidak bersentuhan. dengan staf atau lingkungan... Hal ini untuk menghindari kontaminasi (kontaminasi) bahan dan menjamin objektivitas analisis PCR.

DNA - asam deoksiribonukleat adalah polimer biologis, salah satu dari dua jenis asam nukleat yang menyediakan penyimpanan, transmisi dari generasi ke generasi dan implementasi program genetik untuk pengembangan dan fungsi organisme hidup. Peran utama DNA dalam sel adalah penyimpanan informasi jangka panjang tentang struktur RNA dan protein.

RNA — asam ribonukleat — adalah polimer biologis yang struktur kimianya mirip dengan DNA. Molekul RNA dibangun dari unit monomer yang sama - nukleotida sebagai DNA. Di alam, RNA biasanya ada sebagai untai tunggal. Pada beberapa virus, RNA adalah pembawa informasi genetik. Di dalam sel, ia memainkan peran penting dalam transfer informasi dari DNA ke protein. RNA disintesis pada cetakan DNA. Proses ini disebut transkripsi. DNA mengandung daerah yang berisi informasi yang bertanggung jawab untuk sintesis tiga jenis RNA, yang berbeda dalam fungsinya: informasi atau messenger RNA (mRNA), ribosom (rRNA), dan transportasi (tRNA). Ketiga jenis RNA terlibat dalam satu atau lain cara dalam sintesis protein. Namun, informasi tentang sintesis protein hanya terkandung dalam mRNA.

Nukleotida adalah unit berulang utama dalam molekul asam nukleat, produk dari senyawa kimia basa nitrogen, gula lima karbon (pentosa), dan satu atau lebih gugus fosfat. Nukleotida yang disajikan dalam asam nukleat mengandung satu gugus fosfat. Mereka diberi nama sesuai dengan basa nitrogen yang dikandungnya - adenin (A) yang mengandung adenin, guanin (G) - guanin, sitosin (C) - sitosin, timin (T) - timin, urasil (U) - urasil. DNA mengandung 4 jenis nukleotida - A, T, G, C, RNA juga mengandung 4 jenis - A, U, G, C. Gula di semua nukleotida DNA adalah deoksiribosa, RNA adalah ribosa. Ketika asam nukleat terbentuk, nukleotida, dengan mengikat, membentuk tulang punggung gula-fosfat molekul, di satu sisi ada basa.

Primer - DNA pendek yang digunakan untuk mereplikasi untai cetakan. Masing-masing primer melengkapi salah satu untaian template untai ganda, membingkai awal dan akhir daerah yang diperkuat.

1. Glick B., Pasternak J. Bioteknologi Molekuler. Prinsip dan Aplikasi. Per. dari bahasa Inggris - M.: Mir, 2002 .-- 589 hal., Sakit. ISBN 5-03-003328-9
2. Shchelkunov S.N. Rekayasa genetika - Novosibirsk: Saudara. univ. penerbit, 2004. - 496 hal.; Saya akan. ISBN 5-94087-098-8
3. Patrushev L.I. Sistem genetik buatan - Moskow: Nauka, 2005 - 2 volume - ISBN 5-02-033278-X

PENTING!

Informasi di bagian ini tidak dapat digunakan untuk diagnosis diri dan pengobatan sendiri. Dalam kasus rasa sakit atau eksaserbasi penyakit lainnya, tes diagnostik harus ditentukan hanya oleh dokter yang hadir. Untuk diagnosis dan resep pengobatan yang benar, Anda harus menghubungi dokter Anda.