PCR analiza na klamidiju je negativna. O lančanoj reakciji polimeraze (PCR) za klamidiju. Dijagnoza infekcije hlamidijom

Analiza na klamidiju kod žena proučava se PCR metodom, otkrivajući sa velikom preciznošću prisustvo i koncentraciju štetnih bakterija u organizmu na osnovu DNK studija ćelija biomaterijala.

Testiranje na klamidiju kod žena je važna studija... Uostalom, klamidijska infekcija nije samo bolest koja se prenosi spolnim odnosom, već i tako podmukla bolest koja, bez posebnih manifestacija simptoma, može uzrokovati razvoj primarne neplodnosti ili uobičajenog pobačaja.

Studije koje se provode PCR tehnikom rade se u cilju dijagnosticiranja infekcija, izazivanje sljedećih virusa, kao što su mikoplazma, ureaplazma, klamidija i drugi. Da biste ispitali prisutnost klamidije i drugih zaraznih bolesti, potrebno je dati krv za testove, brisove za bakteriološku kulturu ili struganje.

Ako uzmete bris za kulturu ili struganje, onda se klamidija, kao najpodmuklija bolest koja se prenosi seksualnim odnosom, možda neće naći. Uostalom, atipične bakterije, poput klamidije, se razmnožavaju i koncentrišu unutar drugih ćelija u tijelu. Zbog toga se bolest kao što je klamidija (i ureaplazma) praktično ne identifikuje u studijama u okviru uobičajenih analiza.

Period inkubacije razvoja klamidije prije utvrđivanja izraženih simptoma traje do 3 sedmice. Za to vrijeme infekcija ima vremena da se integrira u ćeliju tijela, kako kod muškaraca tako i kod žena. PCR dijagnostika omogućuje vam da ranije otkrijete virus i spriječite širenje takvog patogena kao što je ureaplazma.

Kada je tijelo već zahvaćeno bolešću, kod muškaraca se javljaju sljedeći simptomi:

• ovaj urin je mutan;
• jutarnji iscjedak iz uretre;
• svrab i peckanje prilikom mokrenja;
• opće stanje slabosti s povećanjem tjelesne temperature;
• primjećuje se iscjedak sa krvavim nečistoćama tokom mokrenja, pa čak i krvava ejakulacija.

Znakovi klamidije kod žena su:

• prisutnost neugodnog mirisa genitalija;
• žućkasti iscjedak sluzavog sastava iz vagine;
• svrab i neugodan osjećaj peckanja tokom mokrenja;
• slabost zdravlja sa blagim porastom temperature.

Patogeni kao što su klamidija i ureaplazma su opasni jer mogu pokazati blage simptome za otkrivanje i na kraju nestati. Zanemaren oblik aktivnosti u tijelu patogena, kao što su klamidija i ureaplazma, dovodi do poraza unutrašnje organe, kako kod muškaraca tako i kod žena.

Analiza klamidije - metode za otkrivanje klamidije za muškarce i žene

Dozvoljeno je dijagnosticirati klamidiju pomoću laboratorijska metoda istraživanja, gdje uzimaju biomaterijal za rad. Postoji niz metoda za identifikaciju patogena kao što su klamidija i ureaplazma:

• (ovo je genetsko-biološka studija metoda polimerazne lančane reakcije) sa 100% preciznošću otkriva štetna tijela u biomaterijalu kao što su areaplasma, klamidija i dr.
• Bakteriološko ispitivanje kulture je kada se uzima materijal za inokulaciju za uzgoj, otkrivanje i identifikaciju bakterija (klamidija, ureaplazma i druge) u posebnom hranljivom mediju.
• ELISA (ovo je enzimski imunosorbentni test) mora se poduzeti da bi se otkrila antitijela na identificirani patogen.
• RIF (imunofluorescentna mikroskopija) je analiza koja se mora proći kako bi se temeljno identifikovala klamidija.

Uzročnik genitourinarne klamidije - Chlamidia trachomatis - je mikroorganizam koji se može razmnožavati samo unutar ćelije (najčešće epitelne ćelije urogenitalnih organa). Klamidiju često karakterizira latentan i asimptomatski tok, što je razlog učestalosti komplikacija koje nastaju na njenoj pozadini.

Dugo vremena, prije stvaranja metode za umnožavanje nukleinskih kiselina, dijagnoza klamidije je bila teška, jer uzročnik nije vidljiv uobičajenim mikroskopskim pregledom. Postojao je pokušaj uvođenja citološke metode s bojom razmaza prema Romanovsky-Giemsi i identifikacijom specifičnih intracelularnih inkluzija.

Ali ova metoda je zahtijevala značajna ulaganja ekonomskih resursa, vremena i dostupnost iskusnog kvalifikovanog laboratorijskog asistenta. I to je sve s niskim sadržajem informacija ove metode - oko 10%.

Pokazi sve

1. Uvod

Više informacija o Chlamydia trachomatis i načinima infekcije možete pronaći u ovom članku (). I ovdje ćemo se detaljnije zadržati na metodama dijagnosticiranja genitourinarne klamidije i dekodiranja mogući ishodi analize.

Prvi serološki test, uveden da potvrdi dijagnozu urogenitalne klamidije, bila je reakcija fiksacije komplementa (skraćeno RAC). Test je brzo izgubio na važnosti zbog velike učestalosti lažno pozitivnih rezultata.

Već dvije decenije, jedna od najinformativnijih metoda za dijagnosticiranje urogenitalne klamidije bila je metoda direktne imunofluorescencije korištenjem monoklonskih antitijela. Na pozadini gore navedenih metoda odlikovali su ga nešto viši pokazatelji specifičnosti i osjetljivosti. U isto vrijeme, metoda je zahtijevala snabdijevanje laboratorije skupom opremom i reagensima.

Druga metoda, relevantna do danas, je otkrivanje klamidije u ćelijskoj kulturi. Ova metoda će biti opisana u nastavku.

Na ovaj ili onaj način, sada je sveprisutan još jedan test za klamidiju - proučavanje iscjetka ili struganja iz uretre, vagine ili cervikalnog kanala pomoću PCR-a.

1. 1 PCR dijagnostika. Metodu amplifikacije DNK preporučuju savezni i evropski klinički protokoli za dijagnozu urogenitalne klamidije. Što se tiče inicijalne detekcije infekcije, njena specifičnost je 100%, senzitivnost je 98-100% (nivo dokaza A, nivo dokaza I).
2. 2 NASBA (metoda amplifikacije RNA).
3. 3 Izolacija klamidije u ćelijskoj kulturi.
4. 4 Citološka metoda. Ova metoda ispitivanja razmaza je malo informativna u dijagnozi genitourinarne klamidije (specifičnost 10-12%): postoji mala vjerovatnoća otkrivanja intracelularnih inkluzija - takozvanih Halberschetder-Provachekovih tijela. Osim toga, mikroskopijom se broji broj leukocita (povećanje njihovog broja je dokaz upalnog procesa), kao i proučavanje flore i otkrivanje gljivica sličnih kvascu.
5. 5 Serološki testovi.
6. 6 Posljednje tri metode (3,4,5) mogu se koristiti samo u određenim situacijama kada metode amplifikacije DNK i RNK (PCR i NASBA) nisu dostupne.

Analize na klamidiju su propisane:

1. 1 Skrining genitalnih infekcija tokom trudnoće i priprema pre poroda.
2. 2 Preporučljivo je polagati testove jednom godišnje za žene i muškarce mlađe od 25-30 godina, kao i za osobe koje nisu imale redovne partnere u proteklih godinu dana ili su nedavno promijenile partnera.
3. 3 Osobe sa simptomima uretritisa, vaginitisa, cervicitisa.
4. 4 Žene sa PID (salpingooforitis, endometritis i tako dalje).
5. 5 Ako se kod pacijenta nađe bilo koja druga genitalna infekcija.
6. 6 Mladići sa upalom epididimisa i orhitisom.
7. 7 U pripremi za intrauterinu intervenciju.
8. 8 S upalom pluća i gnojnim konjunktivitisom kod novorođenčeta.

2. PCR za Chlamydia trachomatis

Suština PCR metode je otkrivanje genetskog materijala (DNK) u uzorku testa i njegovo dovršavanje dodavanjem "građevnog" materijala (deoksinukleoribofosfata). Kao rezultat toga, lanac DNK se produžava, njegovo otkrivanje postaje moguće pomoću elektroforeze i / ili fluorescencije.

Sve manipulacije se izvode u posebnom uređaju - pojačivaču, koji samostalno kontrolira promjenu temperature i faze protoka prema broju potrebnih ciklusa pojačanja.

PCR omogućava otkrivanje klamidije već 3 dana nakon infekcije; kod visokog rizika, studija se ponavlja 2 sedmice nakon navodne infekcije.

Trenutno stiče veliku popularnost. Uz njegovu pomoć istražuju se i kvalitativne i kvantitativne karakteristike vaginalne mikroflore.

PCR u realnom vremenu karakteriziraju kratko vrijeme ispitivanja, visoka specifičnost i osjetljivost (oko 88-90%).

Ali da bi potvrdili urogenitalnu klamidiju, brojni autori preporučuju korištenje monokomponentnih PCR kompleta zbog njihove veće osjetljivosti (100%) na chlamydia trachomatis.

Ovaj savjet je relevantan u situaciji kada liječnik sumnja na prisutnost hlamidijske infekcije kod pacijenta, a studija se provodi kako bi se potvrdila dijagnoza. U nedostatku specifičnih simptoma kod žene, preporučljivije je provesti kompleksni PCR(nivo dokaza II).

3. Amplifikacija klamidijske RNK (NASBA)

Ovo je relativno nova za Rusiju, ali informativnija molekularno biološka metoda. Njegova suština leži u detekciji RNA lanaca u materijalu (razmaz, struganje, urin i tako dalje), čije prisustvo prati proces izgradnje i vitalne aktivnosti ćelije klamidije.

RNK je transporter genetskih informacija iz DNK i graditelj ćelijskih struktura patogena sintezom proteina.

Po prisustvu RNK u pozitivnim rezultatima NASBA može se suditi o efikasnosti sprovedene antibakterijske terapije: procenjuje se održivost klamidije. PCR baziran samo na detekciji DNK nema ovu mogućnost.

NASBA se može koristiti za praćenje izlječenja ranije od PCR-a. Za praćenje efikasnosti liječenja, ova metoda je relevantna samo 14 dana nakon posljednjeg uzimanja antibiotika.

4. Kako se testirati na hlamidiju za žene?

Žene mogu uzeti analizu na klamidiju pomoću PCR ili NASBA metoda od ginekologa, dermatovenerologa.

Materijali za istraživanje kod žena obično su:

• Struganje iz uretre, vagine, cervikalnog kanala van menstruacije. Uslov je prisustvo epitelnih ćelija u prikupljenom materijalu. Kod redovnog uzimanja brisa, mukoznog iscjetka, gnoja i slično, rezultat možda nije informativan.

Struganje za analizu kod žena se uzima sa vanjskog otvora uretre, cervikalnog kanala i stražnjeg forniksa vagine.

1. 1 Kod upotrebe univerzalne sonde: nakon uzimanja materijala, radni dio sonde se odlomi i uroni u Eppendorf epruvetu sa rastvorom konzervansa.
2. 2 Kada koristite Volkmann kašiku: ispire se u epruveti sa rastvorom konzervansa. Nakon toga, kontejner se dobro zatvori, a instrument se dezinfikuje i steriliše.
• Prva porcija slobodno oslobođenog urina. Upravo u prvoj porciji urina koncentriran je maksimalan broj deskvamiranih epitelnih stanica urogenitalnog trakta. Kod žena je prvi dio slobodno oslobođenog urina manje informativan (osjetljivost 80-90%), stoga se koristi mnogo rjeđe od struganja. Međutim, nema dokaza da je jutarnji urin više dijagnostički nego, na primjer, dnevni (razina dokaza II).

Urin sakuplja sama pacijentkinja u čistu, sterilnu, suhu posudu. Za istraživanje je dovoljno oko 10 ml urina. Preporučeni period skladištenja je 24 sata, zavisno od potrebnog nivoa temperature (+ 2C… + 8C).

5. Osobine prikupljanja materijala kod muškaraca

Muškarci se mogu testirati na klamidiju kod urologa, dermatovenerologa, reproduktivnog doktora, androloga.

Materijali za istraživanje kod muškaraca obično su:

• Iscjedak iz uretre, struganje iz uretre. Priprema pacijenta: prije uzimanja materijala ne mokriti 2-3 sata, uz obilan iscjedak - 15-30 minuta. Ako postoji obilni patološki iscjedak (na primjer, gnoj), preporučuje se da ih uklonite pamučnim štapićem.

Postupak uzimanja struganja za muškarce je prilično neugodan, ponekad i bolan. Struganje se uzima univerzalnom sondom sa vanjskog otvora uretre. Nakon uzorkovanja, radni dio sonde se odlomi i uroni u Eppendorfovu cijev s tekućinom za konzerviranje.

• Prvi dio slobodnog urina (osjetljivost je veća nego kod žena - 85-95%).
• Prema indikacijama za analizu na klamidiju kod muškaraca, može se uzeti sekret prostate (kod neplodnosti, prostatitisa i drugih bolesti). Priprema uključuje seksualnu apstinenciju u trajanju od 2 dana. Tajnu prostate uzima kvalifikovani specijalista nakon masaže prostate. Glava penisa se mora očistiti sterilnim pamučnim štapićem.

Nakon završene masaže, oslobođeni sok prostate u količini od 0,5-1 ml sakuplja se u suhu Eppendorf epruvetu i dobro zatvara. U nedostatku tajne, prikuplja se prvi dio urina (sadržat će cijelu tajnu) analogno uobičajenoj gore opisanoj tehnici.

Maksimalni rok trajanja svih gore navedenih materijala je 24 sata, uz strogo poštivanje temperaturnog režima u rasponu od + 2C ... + 8C.

Materijal se isporučuje u posebnoj termalnoj posudi sa rashladnim elementima. Za dugotrajno skladištenje, uzeti materijal mora biti zamrznut na period ne duži od 1 mjeseca na temperaturi od -20C. Dozvoljeno je samo jedno odmrzavanje materijala.

6. Dekodiranje PCR i NASBA rezultata

1. 1 PCR i NASBA rezultati su u pravilu dostupni u roku od 24-36 sati, au privatnim laboratorijama vrijeme za rezultate se produžava.
2. 2 Rezultat može biti "pozitivan" (otkrivena je klamidija, odnosno pacijent ima klamidiju) i negativan (nije pronađena klamidija, odnosno pacijent nema urogenitalnu klamidiju ili se dobije lažno negativan nalaz).

Kada se koriste metode amplifikacije nukleinskih kiselina (NAA) za kompetentnu interpretaciju rezultata, moraju se poštovati određeni uvjeti:

1. 1 Kontrolna studija za procjenu učinkovitosti terapije propisuje se ne prije 1-1,5 mjeseci nakon završetka uzimanja lijeka (za PCR), a ne prije 14 dana za NASBA. PCR metoda ne podrazumijeva određivanje vitalnosti otkrivenih mikroorganizama, stoga je potrebno pričekati puni ciklus promjene epitela.
2. 2 Prilikom sakupljanja prve porcije urina nakon posljednjeg čina mokrenja potrebna je pauza od najmanje 3 sata. Uz obilan patološki iscjedak iz uretre, urin se sakuplja 15-20 minuta nakon posljednjeg čina mokrenja.
3. 3 Postoji mišljenje da promjene u hormonskoj pozadini dovode do pojave inhibitora amplifikacije (sluz, krv, gnoj i druge komponente) u materijalu za ispitivanje. Ova situacija je najrelevantnija tokom trudnoće, kod žena.

Predloženo je mnogo načina za rješavanje ovog problema, ali do sada nijedan od njih nije općenito prihvaćen:

1. 1 Situacija sa inhibitorima amplifikacije relevantna je za žene koje nisu trudne 3 sedmice nakon menstruacije.
2. 2 Prilikom uzimanja materijala u prvim danima nakon menstruacije postoji mogućnost lažno negativnog rezultata zbog nedovoljne akumulacije patogena u epitelu. Dakle, optimalni period za uzimanje struganja je 4 sedmice nakon menstruacije.
3. 3 Nema potrebe za posebnom pripremom pacijenta (na primjer, uvođenje bilo kakvih lijekova, pridržavanje određene dijete) prije studije. Ovo neće uticati na rezultat.
4. 4 Postoji problem takozvane kompetitivne inhibicije. Slična situacija nastaje kada laboratorija koristi komplete za PCR dijagnostiku nekoliko vrsta mikroorganizama. Uz značajnu dominaciju bilo koje vrste patogena u uzorku, ovaj drugi može "maskirati" prisustvo drugih vrsta mikroorganizama. Rezultat će biti lažno negativan.
5. 5 Ako se sumnja na lažno pozitivan rezultat, potrebno je ponoviti test. Ova situacija je relevantna kod asimptomatskih infekcija s malim bakterijskim opterećenjem. U ovom slučaju moguće je proučavati isti uzorak, ili uzeti novi, kao i koristiti drugačiji test ili čak istraživačku metodu (klasa preporuke B, nivo validnosti II). Ako se u početnom materijalu otkrije veliki broj klamidija, ponovljeno istraživanje će biti nepotrebno i ekonomski neopravdano.

7. Enzimski imunotest

Prema najnovijim saveznim smjernicama, enzimski imunosorbentni test (ELISA) se ne koristi za dijagnosticiranje nekomplicirane urogenitalne klamidije (cervicitis, uretritis, itd.). Ovo "nepovjerenje" je zbog činjenice da je ELISA relevantnija za teške, duboke lezije klamidije C. trachomatis.

ELISA metoda se zasniva na detekciji u krvi specifičnih antitijela proizvedenih kao odgovor na klamidijske antigene. Kombinacijom tri klase imunoglobulina u krvi pacijenta može se suditi o težini i trajanju infektivnog procesa.

Kao što je već spomenuto, ova metoda, prilikom otkrivanja urogenitalne klamidije, ima niz nedostataka:

1. 1 Nije informativan u dijagnozi ascendentne infekcije, cervicitisa i uretritisa.
2. 2 Visoka učestalost unakrsnih reakcija.
3. 3 Učestalost lažno pozitivnih reakcija je visoka.
4. 4 Nije pogodno za praćenje izlječenja nakon antibiotske terapije, jer je vijek trajanja specifičnih antitijela u krvi nepoznat;
5. 5 Omogućava dijagnozu pretežno dubokih lezija, na primjer, kongenitalne hlamidije kod novorođenčadi (klasa preporuka A, nivo dokaza I).

Za ELISA se koristi venska krv pacijenta uzeta na prazan želudac. U odbranu ove metode može se napomenuti:

1. 1 Njegova niža cijena u odnosu na PCR.
2. 2 Zadovoljavajuća specifičnost reda 90%.
3. 3 Brzina izvršenja.
4. 4 Jednostavnost prikupljanja i skladištenja materijala.

8. Identifikacija klamidije u ćelijskoj kulturi (na McCoy mediju)

Ova metoda je jedinstvena po tome što vam omogućava da procijenite ne samo kvalitetu terapije, već i da odredite osjetljivost klamidije na različite grupe antibakterijskih lijekova.

Suština metode se sastoji u inficiranju tretirane ćelijske kulture prikupljenim materijalom, nakon čega slijedi sjetva na hranjivu podlogu i inkubacija dva dana. Prisustvo klamidije u dobijenim ćelijama utvrđuje se PCR-om.

Da bi se utvrdila osjetljivost na antibiotike, u tretiranu ćelijsku kulturu unosi se medij za rast koji sadrži određeno antibakterijsko sredstvo i inkubira 5 dana.

Učinkovitost lijeka određena je izostankom ili usporavanjem rasta u određenim grupama. Prisustvo rasta ukazuje na otpornost na antibiotik koji je dodat u hranljivu podlogu.

Nedostaci ove dijagnostičke metode su trajanje (7 dana) i visoka cijena, stoga se u kliničkoj praksi koristi izuzetno rijetko. Obično je indikacija za njegovo imenovanje dugotrajna neučinkovita terapija antibioticima.

9. Ekspresne metode

U inostranstvu se modifikovani serološki testovi koriste kao rutinske, jeftine metode za otkrivanje hlamidijske infekcije.

9.1. Klamidija-antigen ELISA medac test sistem

Test sistem radi na principu čvrste faze ELISA analize. Gotovi test sistem je obložen genetski konstruisanim gotovim specifičnim antitelima. Ova antitijela su povezana sa posebnim enzimskim kompleksom.

Kada se antigeni vežu na antitijela, enzimi se oslobađaju, pojavljuje se žuto-zeleni sjaj, čiji intenzitet uzima u obzir spektrofotometar.

Za razliku od široko rasprostranjenog ELISA testa, gdje krv služi kao materijal za istraživanje, pri korištenju ovog test sistema kao supstrat služi bris ili struganje uzeto od žene ili muškarca. Osetljivost ove metode je oko 65-70%, a specifičnost 90-100%.

9.2. REEF

Osnova reakcije imunofluorescencije (RIF) je direktno vezivanje antigena sa obilježenim antitijelima koja daju zeleni sjaj. Hlamidijska tijela su osvijetljena unutar ćelije. Rezultat se procjenjuje fluorescentnom mikroskopijom.

Osetljivost ove metode je oko 50%, što je povezano sa velikom učestalošću lažnih rezultata. To je zbog subjektivne percepcije rezultata (istraživanje provodi laboratorijski asistent), velike vjerovatnoće unakrsnih reakcija i kršenja tehnike uzorkovanja biološkog materijala. Koristeći ovu metodu, nemoguće je procijeniti efikasnost liječenja.

S obzirom na sve nedostatke, glavne prednosti RIF-a su niska cijena, jednostavnost implementacije i kratko vrijeme dobijanje rezultata. Zbog toga se RIF još uvijek koristi u nekim zemljama kao rutinski test za genitourinarnu klamidiju.

Ako testovi pokažu klamidiju u urinu, to je loše. To znači da govorimo o tako teškoj bolesti kao što je klamidija. Spada u spolno prenosive bolesti, te je stoga vrlo opasan za reproduktivno zdravlje i muškaraca i žena. Da li je moguće pouzdano odrediti hlamidiju urinom, koje metode istraživanja su kvalitetnije?

Hlamidije koriste vrlo originalan način među bakterijama da žive i razmnožavaju se. Oni su ugrađeni u ljudske ćelije, a svaka vrsta klamidije "odabira" određenu vrstu njih. U zahvaćenim tkivima dolazi do upale, imunitet je narušen i počinju adhezivni procesi. Trenutno se hlamidija javlja prilično često, uglavnom zbog toga što se može prenijeti ne samo spolnim putem, već i kućnim putem (higijenski predmeti, sluzni sekret).

Kako prepoznati klamidiju

Da bi se utvrdilo ima li hlamidije u urinu, nije dovoljno provesti rutinsku analizu. Potrebno je istraživanje latentnih infekcija. Jedna od ovih metoda je PCR urina na klamidiju, odnosno metoda lančane reakcije polimerazom.

PCR-om se urin na klamidiju ispituje dan-dva, odnosno vrlo brzo se može dobiti rezultat. Gotovo 100% (tačnije do 96%) otkriva prisustvo patogena u organizmu, a lažno pozitivan odgovor moguć je samo u slučajevima kada se krše pravila uzorkovanja i analize. Ova analiza za klamidiju u mokraći propisuje se ne samo prema indikacijama, već i za prevenciju: uz godišnji liječnički pregled i registraciju trudnica.

Postoji još jedan način određivanja klamidije urinom - kultura ili metoda kulture. Danas je veoma skup, ali i efikasan, otkriva infekciju u 80-90% slučajeva. Osim toga, prema rezultatima koje daje urinokultura na klamidiju, odmah će se saznati koji antibiotik može pobijediti patogena. Ova metoda se ne koristi u rutinskim istraživanjima.

Liječenje klamidije

Ukoliko se otkrije bolest, oba seksualna partnera treba pažljivo pregledati i liječiti, a istovremeno napustiti intimnost tokom terapije. Samo ljekar, za muškarce urolog-androlog, za žene - ginekolog ili venerolog, može odabrati pravi tretman za klamidiju. Sveobuhvatan tretman uključuje ne samo uklanjanje upale, već i jačanje imuniteta, racionalizaciju prehrane i uzimanje vitamina. Zanemarivanje terapije može dovesti do ozbiljnih problema, uključujući neplodnost. Naučnici su odavno dokazali da se često razvija u bračnom paru. Preporučujemo da pročitate više o ovom problemu na linku.

U dijagnostici hlamidije, od svih postojećih metoda, PCR metoda je prepoznata kao najpouzdanija.* Metoda polimerazne lančane reakcije za dijagnostiku hlamidije ima osjetljivost od 98-100%.

Prednosti PCR dijagnostike klamidije

1. Direktno određivanje klamidije u biomaterijalu.

Brojne metode koje se koriste u dijagnostici klamidije, na primjer, ELISA metoda, otkriva samo antitijela i/ili antigene patogena, što nije direktna potvrda klamidijske infekcije, već samo ukazuje na njeno moguće prisustvo.

Metoda lančane reakcije polimerazom (PCR metoda) je molekularno biološka metoda koja je usmjerena na identifikaciju fragmenata DNK specifičnih za klamidiju i direktno ukazuje na prisutnost infekcije.

2. Visoka specifičnost.

Specifičnost PCR metode u dijagnostici klamidije dostiže 100%. Ova činjenica zbog činjenice da se u biomaterijalu koji se analizira otkriva fragment DNK, genetski materijal klamidije. DNK je sastavni dio svakog mikroorganizma i ne može postojati izvan patogena, osim primjenom antibakterijskih lijekova, kada se DNK patogena može utvrditi u roku od mjesec dana.

To nije slučaj s imunološkim testovima, u kojima se često susreću lažno pozitivne reakcije zbog unakrsne reakcije antitijela i antigena.

3. Visoka osjetljivost.

Za izvođenje PCR analize dovoljno je prisustvo pojedinačnih ćelija klamidije u biomaterijalu. Analitička osjetljivost PCR analize 10-100 ćelija u biomaterijalu, kada drugi testovi imaju 103-105 ćelija (mikroskopske, bakteriološke metode).

Postojeće rutinske metode dijagnosticiranja klamidijske infekcije - mikroskopske, imunološke, bakteriološke - ne dozvoljavaju identifikaciju patogena kod 20-40% inficiranih osoba, dok PCR metoda omogućava otkrivanje klamidije kod gotovo 100% pacijenata.

4. Svestranost PCR metode.

Uz detekciju klamidijske DNK u proučavanom biomaterijalu, PCR metoda omogućava istovremenu detekciju nekoliko patogena, na primjer, trichomonas, gonokoka itd.

5. Brzina dobijanja rezultata.

PCR analiza je potpuno automatizovana, što vam omogućava da dobijete rezultate u najoptimalnijem vremenu, i kao rezultat toga, omogućava brz i efikasan tretman.

6. Dijagnostika latentnih i sporih oblika hlamidije.

Urogenitalna klamidijska infekcija je asimptomatska, na primjer, kod više od 70% žena klamidija je asimptomatska. Stoga dosadašnje rutinske dijagnostičke metode nisu mogle otkriti ovu infekciju. V poslednjih godina zbog raširene upotrebe PCR metode u kliničkoj praksi, bilježi se više slučajeva bolesti.

Klamidija: karakteristike

Nekomplikovani oblik hlamidijske infekcije javlja se kod muškaraca češće u obliku upale uretre (uretritis), kod žena - u obliku mukopurulentne upale sluznice cerviksa (cervicitis), uretre (uretritis).

Pretežno urogenitalna infekcija klamidijom javlja se u obliku niskih simptoma i počinje se manifestirati u fazi komplikacija.

Za potpunu dijagnozu urogenitalne hlamidije PCR-om uzima se struganje iz uretre, urin, sekret prostate kod muškaraca, a struganje iz cervikalnog kanala, vagine kod žena.

Uobičajene komplikacije urogenitalne klamidije uključuju:

• orhiepididimitis, epididimitis, prostatitis, striktura uretre;
• cistitis,
• PID (inflamatorna bolest karlice);
• erozivne promjene na grliću maternice;
• neplodnost.

TO moguće komplikacije klamidija kada se širi izvan urogenitalnog trakta uključuje:

• klamidijski konjunktivitis;
• klamidijski faringitis;
• hlamidijski hepatitis,
• Reiterova bolest (kombinacija oštećenja genitourinarnih organa, zglobova i konjuktive); adhezivna bolest specifične etiologije.

Provođenje PCR dijagnostike klamidijske infekcije relevantno je za pacijente:

• u svrhu preventivnog pregleda;
• sa karakterističnim tegobama ili potvrđenom dijagnozom polno prenosive bolesti;
• prilikom planiranja trudnoće;
• pregled trudnica;
• sa opterećenom akušerskom i ginekološkom anamnezom;
• sa sumnjom na urogenitalnu klamidiju;
• prije hirurških intervencija na genitalijama i karličnim organima;
• sa sumnjom na konjuktivitis, artritis klamidijske etiologije.

CMD laboratorije imaju najbolju opremu i visoko kvalifikovano osoblje za PCR istraživanja. U svim fazama PCR istraživanja - od uzimanja biomaterijala do izdavanja gotovog rezultata - poštuju se svi zahtjevi upravljanja kvalitetom, što u potpunosti isključuje ulazak stranog genetskog materijala i dobijanje lažno pozitivnog rezultata.

Prema statistikama, 100 miliona ljudi u svijetu oboli od hlamidije svake godine. Prema WHO, urogenitalna klamidija je najčešća spolno prenosiva infekcija. Bolest je češća kod žena i muškaraca, ali su zaražena i djeca. Svake godine 100.000 žena ostane neplodno zbog klamidije. Infekcija uzrokuje mrtvorođenost, prijevremeno rođenje i smrt novorođenčadi.

Za uspješno liječenje neophodna je ispravna dijagnoza. Danas ćemo pogledati tačnu metodu za dijagnosticiranje klamidije - PCR analizu. Naučit ćemo kako se pripremiti za analizu i šta muškarci i žene ne smiju raditi prije polaganja gradiva.

Iako se infekcija češće prenosi spolnim putem, moguće je da se fetus inficira u maternici ili tokom porođaja. Bolest je uzrokovana atipičnom bakterijom Chlamidia trachomatis. Uzročnik bolesti je pola virus, pola bakterija, pa je stoga teško otkriti.

Hlamidija je spolno prenosiva bolest

Period inkubacije bolesti je 2-4 sedmice. Putevi infekcije hlamidijom su seksualni, vaginalni i analni. Domaćinstvo infekcija se javlja u sauni i kadi. Kod kuće je moguće prenijeti infekciju sa kontaminiranih ruku na oči ili korištenjem zajedničkog ručnika. Bebe se inficiraju tokom porođaja prilikom prolaska kroz porođajni kanal zaražene majke.

Koje bolesti uzrokuje klamidija?

Infekcija hlamidijom nastaje prilikom kontakta sekreta iz genitalnih organa sa sluzokožom partnera. Česte posljedice infekcije:

• Kod muškaraca se bolest javlja u obliku upale mokraćnih puteva – uretritisa.
• Drugi uobičajeni klinički oblici klamidije kod muškaraca su cistitis i prostatitis.
• Upalni proces cerviksa kod žena je cervicitis.
• Proktitis je upala rektuma.
• Upala jajovoda i unutrašnje sluznice materice - salpingitis i endometritis.
• Ektopična trudnoća. At ektopična trudnoća u 25-50% slučajeva klamidija se otkriva u brisu.
• Neplodnost kod žena i muškaraca nastaje kao posljedica upalnog procesa ili cicatricijalnih promjena u zdjeličnim organima.

Hlamidija je uzlazni tip infekcije. Počinju od donjeg genitourinarnog trakta, a uzdižući se više, izazivaju upale i adhezije koje prijete neplodnošću. Klamidija kod muškaraca uzrokuje smanjenu potenciju i neplodnost.

Spektar bolesti se širi sa oslabljenim imunološkim sistemom. U ovom slučaju, respiratorni organi su zahvaćeni u obliku klamidijske pneumonije. Razvijaju se hlamidijski artritis i konjuktivitis.

Identifikacija hlamidije je komplicirana činjenicom da je u 50-67% slučajeva infekcija asimptomatska ili se manifestira znakovima sličnim drugim infekcijama genitalnog trakta.

Trenutno, najosjetljivija metoda za otkrivanje klamidije je PCR analiza.

Ima 100% specifičnost i pouzdana je dijagnostička metoda koja ne zahtijeva potvrdu drugim analizama. PCR je skraćenica za lančanu reakciju polimeraze. Princip analize zasniva se na detekciji DNK klamidije.

Preporučljivo je koristiti nekoliko dijagnostičkih metoda.

PCR analiza ima prednosti u odnosu na druge metode:

• Reakcija je vrlo osjetljiva - otkriva i najmanju česticu uzročnika bolesti.
• PCR analiza je brza metoda testiranja. Analiza traje nekoliko sati, a odgovor se daje sutradan.
• Metoda vam omogućava da direktno otkrijete uzročnika bolesti, a ne reakciju tijela nakon infekcije. Ova prednost omogućava identifikaciju patogena čak i tokom perioda inkubacije bolesti, kada osoba nema znakova infekcije.
• PCR je 100% specifična metoda. Zasniva se na otkrivanju DNK specifične samo za ovaj patogen. DNK (deoksiribonukleinska kiselina) je formula (kod) genetskog lanca svih živih bića od virusa do slona. Svako stvorenje ima svoj specifični DNK lanac.
• Ne postoje kontraindikacije za insceniranje reakcije.

Skup laboratorijskih testova pomoći će u identifikaciji patogena i stadija bolesti

PCR metoda također ima neke nedostatke:

• Analiza može dati lažno pozitivan rezultat ako se ne poštuju pravila analize. Stoga je PCR laboratorija opremljena filterima za zrak. Potreba za filtracijom u laboratoriji je 99,9%.
• PCR daje lažno negativan odgovor čak i uz detaljnu sliku bolesti, ako se ne poštuju pravila za uzimanje materijala.
• Pozitivan rezultat je moguć u slučaju prenesene i izliječene infekcije, jer se metodom utvrđuju i živi i mrtvi patogeni bolesti.

Ljekar koji prisustvuje treba da protumači rezultat. Ako liječnik sumnja u aktivnost klamidije s pozitivnim PCR odgovorom, propisuje ELISA (enzimski imunosorbentni test). Metodom ELISA utvrđuje se imuni odgovor, koji određuje stadij klamidije – akutni proces ili prethodna infekcija.

Priprema za prikupljanje materijala za PCR kod muškaraca

Šta muškarci ne bi trebali da rade prije testiranja:

• 3 sata prije prikupljanja urina ne možete mokriti;
• koristiti otopine za dezinfekciju;
• koristite baktericidni sapun;
• nepoželjna intimnost 36 sati prije uzimanja materijala.

Ispravna priprema je neophodna za izdavanje PCR rezultata. Greške u ovom koraku daju lažno pozitivan ili lažno negativan rezultat.

Da biste dobili pouzdan odgovor na analizu, morate pravilno proći analizu. Prije uzimanja materijala za PCR kod žena, ne smijete:

• mokriti 3 sata ako je test uzet iz uretre;
• ne možete koristiti baktericidni sapun;
• 36 sati prije uzimanja materijala ne koriste se vaginalni supozitoriji, protuupalni i dezinfekcijski tečni agensi;
• seksualni odnos je nepoželjan 36 sati prije prikupljanja materijala;
• ne možete se tuširati;
• testirajte se tokom menstrualnog ciklusa.

Priprema za test nije posebno teška

Pouzdanost rezultata ovisi o tome koliko je pravilno uzet materijal, stoga bi liječnik trebao uzeti materijal za PCR. Laboratorijski stručnjaci smatraju da je trenutak uzimanja materijala najvažniji stupanj dijagnoze.

PCR analiza otkriva DNK klamidije. Za materijal koji se proučava, muškarci uzimaju sekret prostate, spermu ili struganje iz uretre. U nekim slučajevima se od muškaraca uzima krv za PCR. Kod žena se uzima bris ili struganje iz uretre, vagine ili cervikalnog kanala. Kod seksualnog puta infekcije, za identifikaciju urogenitalne klamidije, uzima se struganje sa oboljelog organa, a ne bris na klamidiju. Da bi se razjasnila dijagnoza trahoma, uzima se struganje konjunktive očiju.

Prilikom izvođenja PCR-a, specijalni reagensi se dodaju u epruvete sa materijalom i stavljaju u uređaj. Metodu uređaj provodi automatski u datom režimu. Čini se da je PCR odgovor pozitivan ili negativan. Ako se u testnom materijalu pronađe klamidija, daje se pozitivan odgovor.

Ne postoji niti jedna metoda koja bi 100% precizno identificirala klamidiju i fazu razvoja procesa.

PCR - eksperimentalna metoda biohemije

Stoga, ako se u PCR analizi otkrije klamidija, ELISA analizom treba razjasniti stadij bolesti. Tumačenje testova vrši lekar, uzimajući u obzir anamnezu kliničku sliku bolesti.

Indikacije za PCR

PCR analiza se propisuje u takvim slučajevima:

• akutna urogenitalna infekcija, kod koje se javlja peckanje, svrab, promijenjen miris iscjetka iz genitalija i nelagoda pri mokrenju. Kod muškaraca se krv pojavljuje na kraju mokrenja.
• Produžena infekcija genitourinarnog trakta kod žena - kolpitis, erozija grlića materice ili genitalne bradavice.
• Patološke promjene tokom trudnoće - opterećena akušerska anamneza.
• Pobačaji i mrtvorođenje.
• Neplodnost.

PCR analiza je propisana i za provjeru djelotvornosti antibakterijskog liječenja hlamidije, ali ne ranije od mjesec dana zbog mogućeg prijema lažno pozitivnog rezultata.

Zaključno, podsjećamo da je klamidija najčešća urogenitalna spolno prenosiva infekcija. Bolest je uzrok muške i ženske neplodnosti. Infekcija pogađa bebe u maternici ili na rođenju. U sadašnjoj fazi pouzdana i specifična metoda za dijagnosticiranje bolesti je PCR analiza. Za analizu se koristi bris ili, češće, struganje epitelnih ćelija, kao i krv, sediment urina ili sperma. U nekim slučajevima, kako bi se razjasnio stadij klamidije, PCR metoda je dopunjena ELISA analizom.